北京化學制藥熱原檢測結果判定

來源：發布時間：2025-11-21

基于單核細胞系的穩定性，MAT 熱原檢測可將復孔數從藥典要求的≥4 降至≥3。PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒數據顯示，單核細胞系標曲的 4 復孔與 3 復孔，各濃度點（0.0125-1.0EU/mL）的準確度（相對偏差）與精密度均在標準范圍內，無明顯差異。這一調整的主要依據是單核細胞系消除了 PBMC 的異質性，無需依賴多復孔抵消波動，既能滿足熱原檢測的穩定性與統計學合理性要求，又能減少試劑與耗材消耗，降低檢測成本，同時提升實驗效率。因此樣品預測試時可選擇3復孔進行初步檢測，產品放行還需按照藥典要求進行4復孔測試。

PBMC（外周血單個核細胞）用于 MAT 檢測時供體差異大，IL-6 釋放波動明顯，標準化難度高于單核細胞系。北京化學制藥熱原檢測結果判定

家兔熱原試驗作為熱原檢測領域的 “法定傳統方法”，被中國藥典（ChP）、美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）均列為法定檢測項目，其主要優勢在于可通過家兔體溫應答篩查所有類型熱原，尤其適用于無法排除非內毒素熱原污染的高風險產品，如血液制品、放射性質藥物及部分生物制劑。然而，家兔熱原試驗存在明顯局限：動物個體差異大，需額外投入時間與成本篩選合格家兔；檢測周期長（至少 6 小時），無法滿足生物制品快速放行需求；靈敏度較低（對 LPS 檢測限≥5EU/kg），與全球倡導的“動物福利3R原則”背道而馳。

北京化學制藥熱原檢測結果判定單核細胞活化反應試驗（MAT）利用人源細胞釋放IL-6等因子，可同時檢出病毒、真菌等非內毒素熱原。

MAT 法熱原檢測標曲采用非倍比稀釋，而非 1-0.5-0.25 的倍比稀釋，主要優勢在于提升標曲準確性與適用性，避免稀釋誤差影響。一是可密集覆蓋關鍵濃度區間：熱原檢測的重點關注區為低濃度拐點（如 0.0125-0.1EU/mL）與高濃度平臺區（如 0.5-1EU/mL），非倍比稀釋可在這些區間設置更多濃度點（如 0.0125、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1EU/mL），提升曲線擬合精度，而倍比稀釋低濃度點少，易導致低濃度熱原定量不準。二是降低稀釋誤差累積：倍比稀釋需連續稀釋（如 1EU/mL→0.5EU/mL→0.25EU/mL），每一步誤差會累積，導致低濃度點實際濃度偏離理論值；非倍比稀釋通過單獨配制每個濃度點（如直接用標準品配制 0.025EU/mL），避免誤差累積，提升標曲可靠性。三是適配不同樣品濃度：非倍比稀釋可根據樣品預期濃度調整標曲范圍，如樣品預期濃度 0.05EU/mL，可增加 0.025、0.05、0.1EU/mL 點，確保樣品濃度落在標曲線性區，而倍比稀釋范圍固定，靈活性差。這些優勢使非倍比稀釋成為 MAT 法標曲配制的優先選擇方式。

湖州申科生物熱原檢測試劑盒（MAT 法，貨號 1502100）包含完整的檢測體系，組分按功能可分為細胞培養類、ELISA 檢測類與輔助類，且儲存條件明確。細胞培養類組分包括：2-8℃儲存的培養液（25mL×2 瓶）、96 孔細胞孵育板，-18℃儲存的培養液添加劑（1.5mL×1 管）、細菌內毒素工作標準品，以及需液氮保存的 MAT 細胞（2 支），確保細胞活性與穩定性。ELISA 檢測類組分涵蓋：2-8℃儲存的生物素偶聯抗 IL-6 抗體（200×，60μL）、鏈霉親和素 HRP 復合物（100×，140μL）、TMB 顯色液（12mL）、終止液（6mL），以及抗 IL-6 預包被酶標板（8 孔 ×12 條），無需額外制備抗體，即開即用。輔助類組分包括細菌內毒素檢查用水（8mL×1 管）、稀釋液（25mL）、濃縮緩沖液（10×，25mL×2 瓶）與封板膜，滿足從樣品稀釋到檢測終止的全流程需求。各組分儲存條件嚴格區分，避免因儲存不當導致性能下降，保障檢測結果可靠。

熱原檢測實驗中，標準化培養基與恒定環境讓單核細胞系活性穩定，避免PBMC凍存后的功能衰減。

在 MAT 熱原檢測中，單核細胞系與 PBMC（外周血單個核細胞）的檢測結果穩定性差異明顯。實驗結果數據顯示，單核細胞系的標曲 R2 達 1.000，各濃度點 CV 值極低（如 ST1 為 0.92%、ST2 為 1.5%），相對偏差均在 5% 以內；而 PBMC 的標曲 R2 為 0.997，部分濃度點 CV 值超 20%（如 ST2 為 39.6%、ST6 為 45.5%），相對偏差高達 171.43%。這種差異源于兩者對熱原反應的一致性—單核細胞系能穩定釋放 IL-6，PBMC 則因供體差異導致 IL-6 釋放水平波動，直接影響熱原檢測結果的重復性，單核細胞系更適配準確的熱原定量需求。

家兔法熱原試驗雖能篩查所有類別熱原，卻因周期長、成本高、靈敏度低而逐步被體外方法取代。江蘇原料藥熱原檢測流程

熱作為一種能引起人體溫異常升高的物質，一旦存在于藥品、醫療器械等產品中，將給患者帶來嚴重的健康風險。北京化學制藥熱原檢測結果判定

隨著發熱反應分子機制研究的不斷深化，單核細胞活化試驗（MAT）作為一種體外熱原檢測技術，愈發受到醫藥與醫療器械行業的關注并逐步推廣應用。該方法的原理是：讓人體全血與待檢樣品中的熱原充分接觸后，通過檢測體系中產生的 IL-1β、IL-6（因穩定性強、重復性優，常作為關鍵檢測指標）、TNF 等促炎細胞因子含量，實現對熱原污染程度的評估，整個過程能高度模擬人體先天免疫系統對熱原的應答反應。相較于傳統熱原檢測手段，MAT 的優勢更為突出：不僅可檢出各類熱原污染物，包括尚未明確性質的未知熱原，以及革蘭氏陽性菌（脂磷壁酸）、真菌、病毒等產生的非內毒素熱原，填補了傳統內毒素檢測（如鱟試劑法）的覆蓋空白。此外，MAT 無需使用實驗動物，契合全球 “替代、減少、優化”（3R 原則）的監管導向，目前已被《歐洲藥典》等法規列為家兔熱原試驗的替代方法，進一步提升了其在合規檢測中的適用性。

北京化學制藥熱原檢測結果判定

標簽：熱原檢測支原體檢測宿主細胞殘留DNA檢測內毒素檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

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