上海通用型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

來源：發布時間：2025-11-03

湖州申科生物依據不同宿主的實際生產工藝，借助高質量免疫原與HCP多抗的標準化制備流程，制備出高效價、高覆蓋率的抗體，進而開發出SHENTEK^®HCP檢測試劑盒：適配大腸桿菌表達菌（BL21）生產工藝及克隆菌堿裂法提取質粒工藝，以及適配CHO、MDCK、HEK293、Sf9、VERO、畢赤酵母等不同宿主，可用于中間品、原液及終產品的HCP定量監測。為保障ELISA法對HCP定量檢測的準確性，需對HCP抗體覆蓋率開展驗證。湖州申科的抗體覆蓋率平臺，采用2D Clean-up試劑盒去除蛋白樣品中的干擾物（如洗滌劑、鹽、脂質、酚類、核酸等離子污染物），同時設置2D質控標準品實施嚴格質控，并以陰性抗體作為對照開展平行試驗，以此提升結果準確度。

不同技術平臺獲得的抗體覆蓋率水平不一樣，一般覆蓋率水平從高到低依次IMBS-MS>IMBS-2D>2D-Western Blot。上海通用型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

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宿主細胞蛋白（HCP）多與細胞關鍵功能相關，像細胞增殖、基因轉錄、蛋白合成修飾、細胞存活及凋亡等，工藝過程中會通過細胞分泌，或因細胞死亡、裂解而釋放。生產環節中，主要有三方面因素影響HCP的組成與豐度：①宿主細胞基因組調控及培養工藝：特定工藝下潛在HCP數量可能極多，且并非所有基因都會表達，部分基因的表達存在時間與條件差異；例如大腸桿菌約含4300個基因，不同工藝產物會經歷獨特的翻譯后修飾，增加HCP的總數與生化復雜性。研究表明，大腸桿菌表達的蛋白存在數量差異，這可能是對環境條件的適應性反應，但85-90%有潛在免疫原性的HCP在不同發酵過程中均會出現。②產物表達方式：宿主細胞與外源基因、載體及輔助成分構成的體系，可實現穩定、瞬時及誘導表達；以大腸桿菌為例，常見的表達形式包括胞內表達、分泌表達、可溶性表達、不溶性包涵體形式，以及融合與非融合表達。③純化步驟及產品自身特性：純化過程中能去除99%以上的HCP，但仍有殘留HCP保留在產品中，這些殘留HCP可能與產品結合，隨產品一同完成純化。

CHO-K1宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證HCP 定制化開發需構建成熟平臺、技術實力、合規體系、穩定供應、專業團隊及成功案例的全維度支撐體系。

湖州申科生物參照 USP 通則 <1132.1> 的相關內容，憑借公司在生物制品質量控制領域十余年的深耕經驗，對 LC-MS 檢測 HCPs 的方法開展評價與優化。同時通過為 LC-MS 檢測 HCPs 的整體流程構建完整質控體系，建立起一套抗干擾能力強、穩定性佳、準確度高且結果真實可靠的 LC-MS 檢測 HCPs 標準方法。該檢測技術平臺包含樣品制備、質譜檢測、數據生信分析及質譜結果方法驗證四個部分，目前利用該 LC-MS 平臺已完成對 293T、不同工藝大腸桿菌（E.coli）、CHO、Vero、MDCK、Sf9 等不同工程細胞 HCPs 抗體覆蓋率的檢測分析。

樣品質量是影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結果的因素之一。HCP 檢測覆蓋生物制品生產全流程，包含收獲、純化、制備等多個環節，不同樣品基質會導致 HCP 檢測結果存在明顯差異。以含佐劑的疫苗為例，佐劑會產生干擾，導致成品中難以檢測 HCP，因此通常在吸附工藝前的原液階段開展檢測。此外，樣品的收集、處理及保存方式也對檢測結果有重要影響。處理方式不當可能造成蛋白降解或變性，進而影響檢測結果。比如將歷史批樣品用作內部質控品時，需結合其穩定性數據，合理設定保存條件與保存期限，以此保障檢測方法的準確性和穩定性。

樣品與抗體的匹配程度對宿主細胞蛋白殘留檢測的結果影響很大。

湖州申科生物CHO-K1HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法），采用固相酶聯免疫吸附法原理，可對CHO-K1細胞生產的生物制品中宿主殘留蛋白進行定量檢測。檢測時，向預包被抗CHO-K1HCPs綿羊多抗的酶標板中，加入校準品或待測樣品、HRP標記的抗CHO-K1HCPs綿羊多抗共同孵育。洗滌后加入TMB底物顯色，隨后用終止液終止酶促反應；再用酶標儀在450nm波長下測定吸光度，該吸光度與校準品或待測樣品中HCPs濃度呈正相關，依據校準品擬合的劑量-反應曲線，即可算出待測樣品中HCPs的濃度。該試劑盒對待測樣品無需特殊處理，通過合適稀釋比例的適用性驗證，即可直接使用。且試劑盒操作步驟少、檢測快速，同時具備專一性強、性能穩定可靠的特點。

湖州申科自主開發的抗體覆蓋率驗證IMBS平臺經完善驗證，結果可靠，符合法規要求，可用于申報。CHO-K1宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

SHENTEK? AutoElisa-4K HCP 檢測自動化系統可減少人為誤差，滿足 21 CFR Part 11 數據管理要求。上海通用型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

在宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方面，工藝特異型檢測試劑盒（upstream-process）專門針對特定生產工藝設計，其關鍵特征是依托產物的實際宿主細胞開展開發及驗證，通過模擬真實生產流程制備廣譜 HCP 抗原，且要求抗血清具備高覆蓋率以適配工藝變動，從而保障對特定生產流程中 HCP 殘留的高度準確監控。平臺型檢測試劑盒（platform）則由生產商圍繞特定表達宿主細胞及相近工藝自主開發，優勢體現在能借助相同參考標準品與試劑，統一監測基于該宿主細胞生產的不同產品，適用于上游工藝足夠相似的產品線。通用型檢測試劑盒（commercial）屬于市售廣譜檢測方案，適合相似宿主細胞的常規 HCP 檢測；但由于其制備過程未必能完全模擬目標產物的實際生產場景，因此需嚴格評估多克隆抗體對特定產品 HCP 的覆蓋率，以此確保檢測結果的可靠性。這三類試劑盒覆蓋了從深度定制到通用篩查的各類 HCP 檢測需求。

上海通用型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

標簽：宿主細胞殘留DNA檢測內毒素檢測支原體檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測熱原檢測

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