熒光壽命成像分析:熒光壽命是用于幾種生物測定的穩健參數。它有可能替代傳統的測量技術,如吸收法、冷光法或熒光強度法3。熒光團物理化學環境的任何變化都會導致熒光壽命的改變。可通過各種機制來研發基于壽命的分析,例如簡單的結合測定,涉及到兩個組分的結合(一個被熒光標記)而引起FLT的變化。另一種機制是猝滅釋放型測定,涉及大量過量存在的猝滅物質,其具有低而有限的熒光。一旦熒光化合物被釋放(通過酶促反應或與互補DNA結合),系統的壽命就會改變。FLT可與FRET(熒光共振能量轉移)分析結合用于能量轉移效率測量。將熒光壽命成像與共聚焦成像技術結合起來,實現人體三維熒光壽命成像,實現人體三維功能成像奠定基礎。佛山紅外熒光壽命成像價格
熒光壽命成像技術有兩種:時間域和頻率域。(1)時域FLIM:需要脈沖光源,所以一般在雙光子的系統上比較常見FLIM(熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM),理由一是激光是脈沖的,二是買雙光子的老師一般也搭配一個FLIM。(2)頻域FLIM:需要一個相位調制的光源,有用LED調制的。熒光壽命成像FLIM的應用:1)細胞體自身熒光壽命分析;2)自身熒光相對熒光標記的有效區分;3)具有相同頻譜性質的不同熒光標記的區分;4)活細胞內水介質的PH值測量;5)局部氧氣濃度測量;6)活細胞內鈣濃度測量;7)時間分辨Forster共振能量轉移(FRET):納米級尺度上的遠程測量,環境敏感的FRET探針定量測量。佛山紅外熒光壽命成像價格熒光壽命成像主要通過TCSPC技術實現。
在種類繁多的顯微技術中,熒光壽命顯微成像技術(FLIM)具有對生物大分子結構、動力學信息和分子環境等進行高分辨高精度測量的能力,因此其重要性日漸提升,被普遍地應用于生物學研究及臨床診斷等領域。熒光的特性包含有:熒光激發和發射光譜、熒光強度、量子效率、熒光壽命等,其中,熒光壽命是指熒光分子在激發態上存在的平均時間(納秒量級)。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間,因此,測量熒光壽命需要極快響應時間的探測器。熒光壽命成像的發展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫學檢測有著重要的意義。
影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?散射光的影響: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法:先用短的激發光激發,檢出溶液的拉曼峰,然后進行熒光光譜校正。因為熒光光譜不隨激發光波長的改變而改變,而拉曼光卻隨之改變。高濃度樣品的影響:1)當激發光照射高濃度樣品時,在激發光入口附近產生熒光,但這些熒光并不能進入熒光檢測器。2)高濃度的分子之間相互作用而發生活性阻礙現象。3)熒光的再吸收:即熒光光譜的短波長端和激發光譜的長波長端如果相互重疊,則發生熒光再吸收。熒光壽命成像技術是一種在顯微尺度下展現熒光壽命空間分布的技術。
熒光壽命成像顯微術(FLIM)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術。除了具有特有的發射光譜外,每個熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團在發射光子之前處于激發態的時間。除了標準的熒光強度測量外,壽命分析還可以提供其他信息。過去,壽命成像一直是一種緩慢、復雜的專業化技術。只有經驗豐富的顯微鏡**或物理學家才會使用這種技術。熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質量。它非常適合用于區分熒光發射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號。熒光壽命成像系統是一種用于化學領域的分析儀器。佛山紅外熒光壽命成像價格
熒光壽命成像具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優點。佛山紅外熒光壽命成像價格
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