湖州申科生物在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA 檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域具備扎實(shí)的技術(shù)積累，已搭建起高質(zhì)量、全流程的自主開(kāi)發(fā)平臺(tái)，覆蓋 HCP 檢測(cè)試劑盒研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：①抗原表征與制備：依托合規(guī)平臺(tái)具備 HCP Reference/Antigen 制備能力，借助 2D 凝膠電泳等先進(jìn)技術(shù)保障抗原庫(kù)的代表性；②動(dòng)物免疫與抗體制備：憑借自有免疫動(dòng)物平臺(tái)，把控免疫原設(shè)計(jì)及動(dòng)物免疫過(guò)程，產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的抗體；③體系開(kāi)發(fā)與驗(yàn)證：依靠成熟技術(shù)經(jīng)驗(yàn)開(kāi)發(fā)高靈敏度、高穩(wěn)定性的檢測(cè)體系，并嚴(yán)格遵循 GMP 標(biāo)準(zhǔn)完成方法學(xué)驗(yàn)證。該平臺(tái)通過(guò)全流程自主可控的技術(shù)整合，從源頭保障試劑盒性能的一致性與可靠性，大幅降低不同批次試劑盒的檢測(cè)變異性。其研發(fā)的 HCP ELISA 試劑盒已服務(wù)國(guó)內(nèi)外 200 余家生物醫(yī)藥企業(yè)，為單抗、疫苗等生物制品的工藝開(kāi)發(fā)、質(zhì)量控制及 IND/BLA 等法規(guī)申報(bào)，提供符合監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)的定制化檢測(cè)方案。

湖州申科生物CHO-K1HCP殘留檢測(cè)試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），采用固相酶聯(lián)免疫吸附法原理，可對(duì)CHO-K1細(xì)胞生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白進(jìn)行定量檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)，向預(yù)包被抗CHO-K1HCPs綿羊多抗的酶標(biāo)板中，加入校準(zhǔn)品或待測(cè)樣品、HRP標(biāo)記的抗CHO-K1HCPs綿羊多抗共同孵育。洗滌后加入TMB底物顯色，隨后用終止液終止酶促反應(yīng)；再用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，該吸光度與校準(zhǔn)品或待測(cè)樣品中HCPs濃度呈正相關(guān)，依據(jù)校準(zhǔn)品擬合的劑量-反應(yīng)曲線，即可算出待測(cè)樣品中HCPs的濃度。該試劑盒對(duì)待測(cè)樣品無(wú)需特殊處理，通過(guò)合適稀釋比例的適用性驗(yàn)證，即可直接使用。且試劑盒操作步驟少、檢測(cè)快速，同時(shí)具備專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠的特點(diǎn)。

大腸埃希氏菌（Escherichiacoli，簡(jiǎn)稱E.coli，又稱大腸桿菌）作為模式微生物，在生命科學(xué)研究領(lǐng)域應(yīng)用較多。伴隨基因治療產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，它還成為質(zhì)粒DNA（pDNA）生產(chǎn)的主要宿主菌。質(zhì)粒樣品常規(guī)提取工藝中，常使用強(qiáng)堿性溶液進(jìn)行細(xì)胞裂解與蛋白質(zhì)變性，這種處理使其中的宿主細(xì)胞蛋白（HCPs）與傳統(tǒng)物理破碎法得到的HCPs差異明顯，進(jìn)而導(dǎo)致采用免疫學(xué)原理的檢測(cè)方法時(shí)，殘留檢測(cè)結(jié)果偏差較大。湖州申科生物的E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測(cè)試劑盒，適用于大腸埃希氏菌（即大腸桿菌）克隆菌株的HCPs檢測(cè)，涵蓋DH5α、Top10、JM109等常見(jiàn)菌株。該試劑盒的抗體制備過(guò)程中，采用堿裂工藝制備的HCPs免疫動(dòng)物，得到專屬抗體，可用于經(jīng)堿液裂解工藝處理后的宿主細(xì)胞蛋白（HCPs）定量檢測(cè)。

為何定制化試劑盒會(huì)成為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇？關(guān)鍵原因與檢測(cè)準(zhǔn)確性、藥物安全性緊密關(guān)聯(lián)。HCP ELISA 檢測(cè)屬于多分析物檢測(cè)技術(shù)，其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，高度依賴校準(zhǔn)品品質(zhì)、抗體質(zhì)量及檢測(cè)方法的構(gòu)建。定制化 HCP ELISA 檢測(cè)試劑盒的主要優(yōu)勢(shì)，在于其依托更具代表性的 HCP 抗原對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫，由此制備的 HCP 抗體針對(duì)性更突出。這類(lèi)針對(duì)性抗體可大幅降低 HCP 漏檢風(fēng)險(xiǎn)，特別是針對(duì)生產(chǎn)工藝中特有的高風(fēng)險(xiǎn) HCP 因子，能呈現(xiàn)更優(yōu)的檢出成效，為藥物的安全性、有效性及質(zhì)量可控性提供堅(jiān)實(shí)保障。

LC-MS技術(shù)作為生物制品宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)的新趨勢(shì)，應(yīng)用時(shí)需重點(diǎn)考慮以下五方面：①穩(wěn)定性：需對(duì)HCPs的LC-MS檢測(cè)流程開(kāi)展驗(yàn)證，全流程需實(shí)施嚴(yán)格QC管控，以保障檢測(cè)結(jié)果的一致性與穩(wěn)定性。②可重復(fù)性：不同類(lèi)型生物制品中HCPs的提取效率存在差異，且不同人員操作會(huì)產(chǎn)生偏差，因此需在上機(jī)前通過(guò)多種方法評(píng)估HCPs提取效率，規(guī)避人為因素導(dǎo)致的結(jié)果重復(fù)性不佳問(wèn)題。③準(zhǔn)確度：在方法開(kāi)發(fā)與驗(yàn)證階段，需設(shè)置內(nèi)標(biāo)并確定定量算法，通過(guò)內(nèi)標(biāo)響應(yīng)回算得出HCPs含量，以此保證定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。④抗干擾能力：高豐度蛋白與特殊基質(zhì)會(huì)干擾質(zhì)譜檢測(cè)，需借助前處理手段去除高豐度蛋白或特殊基質(zhì)，從而降低其對(duì)HCPs肽段質(zhì)譜檢測(cè)的影響。⑤真實(shí)性：樣品中除HCPs外的其他物質(zhì)在質(zhì)譜分析中也會(huì)產(chǎn)生質(zhì)譜信號(hào)，需去除復(fù)雜背景噪音以避免假陽(yáng)性與假陰性情況，同時(shí)建立規(guī)范的生信分析流程。在分析流程搭建過(guò)程中，同樣需制定嚴(yán)格的QC標(biāo)準(zhǔn)，并通過(guò)后續(xù)多種方法驗(yàn)證，明確該標(biāo)準(zhǔn)的真實(shí)性。

依據(jù)美國(guó)藥典 1132 章節(jié)規(guī)定，HCPs 校準(zhǔn)品需具備代表性，能夠覆蓋實(shí)際產(chǎn)品生產(chǎn)工藝中的 HCPs。結(jié)合 HCP 免疫檢測(cè)方法的使用目的與預(yù)期風(fēng)險(xiǎn)管理需求，為滿足工藝開(kāi)發(fā)、驗(yàn)證需求，同時(shí)應(yīng)對(duì)下游工藝可能出現(xiàn)的異常失效或工藝變更情況，建議選用上游發(fā)酵工藝末端（如澄清處理后的工藝點(diǎn)）的樣本作為 HCPs 來(lái)源。實(shí)際制備時(shí)，可采用空細(xì)胞或空載細(xì)胞，在模擬實(shí)際工藝的預(yù)設(shè)條件下采集樣本，再通過(guò)二維電泳、高分辨率質(zhì)譜等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，對(duì)模擬工藝與實(shí)際工藝下 HCPs 的代表性開(kāi)展表征分析。越靠近下游工藝，HCPs 的蛋白種類(lèi)越少，雖更接近成品（DS）中的 HCPs，但這類(lèi)樣本可能無(wú)法滿足工藝開(kāi)發(fā)與驗(yàn)證需求，也難以覆蓋工藝潛在風(fēng)險(xiǎn)，因此通常不推薦使用，或只作為上游工藝 HCPs 免疫檢測(cè)方法的輔助材料。