E.coli克隆菌宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

來源：發布時間：2025-11-04

湖州申科生物憑借自主可控的供應鏈與經嚴格驗證的技術性能，確保 HCP 檢測試劑盒的長期穩定供應及出色分析能力。一方面，公司實現關鍵物料自研自產：校準品通過凍干工藝大規模生產，能穩定儲存 10 年以上；抗體經大動物免疫制備，產量可支撐≥10,000 盒試劑盒生產，確保同批次抗體連續供應超 10 年；試劑盒經多批次驗證，批內與批間一致性表現良好。另一方面，所有產品均參照 ICH Q2（R2）及 ICH M10 法規要求完成驗證：以大腸桿菌（E.coli）HCP 產品為例，其線性范圍（1-243 ng/mL）的 R2>0.999，各濃度點回收率偏差≤5%；準確度處于 81.2%-111.6% 區間，中間精密度 CV 值為 5.7%-12.4%；定量限（LLOQ）低至 1.5 ng/mL，且對 CHO、HEK293 等多種宿主細胞的交叉反應均低于檢測限。同時，借助二維電泳（檢出 826 個蛋白點）與質譜法（鑒定 2204 個蛋白點）對校準品進行雙重表征，并運用 IMBS-2D（覆蓋率 > 70%）與 IMBS-MS（覆蓋率 84.7%）正交技術驗證抗體覆蓋率，從源頭保障檢測結果的全面性與可靠性。

宿主細胞蛋白殘留檢測試劑盒的開發不是一個簡單的過程，是一個對平臺、技術均有很高要求的整體流程。E.coli克隆菌宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

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由于 HCPs 屬于復雜的多分析物，為制備覆蓋率盡可能高的抗體（以覆蓋工藝特有的高風險 HCPs），需采用可靠的免疫策略。獲得符合性能要求的抗體后，需借助經過驗證的 2D 或 LC-MS 方法對抗體覆蓋率進行表征，確保抗體可充分覆蓋各實際工藝下產生的 HCPs。在擁有代表性抗原與優良性能抗體的基礎上，開展 ELISA 檢測體系開發，涵蓋原輔料篩選與制備研究、各組分工藝及反應體系研究、穩定性研究等重要內容。檢測體系開發完成后，需依據 ICH 及藥典要求開展分析方法驗證評估，確保體系的線性、范圍、檢測限、定量限、準確度、精密度、專屬性及耐用性均滿足法規要求。

E.coli表達菌宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析工藝特異型、平臺型、通用型HCP檢測試劑盒各有特點，滿足不同需求。

宿主細胞蛋白殘留檢測中，抗體覆蓋率評估實驗的操作難度較高，需在實驗方法建立階段對關鍵步驟開展充分驗證，以確保實驗方法具備穩健性。湖州申科研發的磁珠捕獲式 IMBS 技術（immunomagnetic beads separation，免疫磁珠分離），在開發過程中已對關鍵步驟進行充分驗證，相關驗證結果已通過專業評審，具體驗證內容（部分）如下：① 方法優化：圍繞磁珠與抗體的偶聯比例、洗滌液體積、洗滌次數、洗脫次數等關鍵參數開展優化驗證，確保方法穩健性；② 過程質控：二維電泳存在實驗步驟繁瑣、時間跨度大、中間環節難把控等問題，因此在等電聚焦實驗環節引入熒光標記多肽，可快速判定等電聚焦效果；同時在 SDS-PAGE 電泳兩側增設 40 ng 銀染質控樣品，用于控制銀染顯色過程；③ 方法重復性：針對 2D 分析與 LC-MS 分析開展重復性驗證，其中 2D 分析方法的重復性可達 80% 以上，LC-MS 分析方法的重復性可達 90% 以上；④ 上樣量優化：針對 2D 分析與 LC-MS 分析實施上樣量驗證，規避上樣量差異對檢測結果的影響；⑤ 假陽性排查：排查樣品與陰性抗體間是否存在非特異性結合，確認 IMBS 實驗設定的步驟與參數是否會導致假陽性結果。

MDCK（Madin-DarbyCanineKidney，馬丁達比犬腎上皮細胞）細胞系是源于犬腎的持續性細胞系，廣泛應用于流感病毒增殖純化、流感疫苗生產等過程，作為細胞基質使用。憑借高病毒產量與滴度、無適應性突變、易馴化等優勢，MDCK細胞已成為業界公認的流感病毒毒株分離及流感疫苗生產適配細胞系。和其他產品雜質類似，MDCK宿主殘留蛋白（HCP）可能對生物制品的安全性與有效性產生不良影響，因此在生產監測、產品放行等環節，需對其開展定量研究并實施嚴格控制。SHENTEK^®MDCK HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法），是湖州申科生物自主研發、擁有完全自主知識產權且關鍵試劑實現全國產化的MDCK HCP通用檢測試劑盒。該試劑盒適用于基于MDCK細胞基質的病毒增殖純化、疫苗生產等過程，可對其中的MDCK宿主殘留蛋白進行定量檢測，且操作步驟簡便快捷、檢測專一性高、性能穩定可靠。

抗體覆蓋率評估屬于定性分析，要求是穩定性好，靈敏度高，與ELISA檢測的原理相似，確保結果準確可靠。

磷脂酶 B 樣蛋白 2（Phospholipase B-Like 2，PLBL2/PLBD2），憑借強共純化能力、高免疫原性及潛在酶活性，被認定為 CHO 宿主細胞蛋白（HCP）中的關鍵高風險因子之一。當前行業建議，需針對性開發特定檢測方法，對這類已知或特定蛋白進行監控，以更有效把控其潛在風險。SHENTEK^® CHO PLBL-2 殘留檢測試劑盒（酶聯免疫吸附法）由湖州申科生物自主研發，擁有完全自主知識產權，是一款 CHO PLBL-2 蛋白通用檢測試劑盒。該試劑盒適用于對 CHO 表達系統生產的生物制品中，CHO HCP 高風險蛋白 PLBL-2 進行定量檢測，且操作步驟少、檢測快速，兼具強檢測專一性與穩定可靠的性能。

湖州申科全自動 HCP ELISA 系統實現從加樣到檢測自動化，提升效率。北京通用型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒開發要求

生物制品臨床申報需提交 HCP 抗體覆蓋率數據，否則可能面臨監管發補要求。E.coli克隆菌宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法開發

定制化試劑盒之所以成為宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的優先選擇，關鍵原因之一是其構建的檢測體系更契合商業化生產中HCP工藝雜質的控制需求。在HCP校準品與HCP抗體這兩大關鍵試劑組分達標后，定制化方法的建立與優化會依托真實的純化中間品及原液樣品開展——通過優化檢測條件提升對低濃度HCP的檢測靈敏度，從而滿足工藝驗證與過程控制的需求。臨床三期階段需對生產工藝開展系統驗證，以保障其穩定性與可重復性，而定制化HCPELISA檢測方法能更準確地監測工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供堅實支撐。過程控制環節，借助工藝特異型HCP ELISA檢測方法，可實時監測生產過程中的HCP水平，擁有更強的生產異常預警能力，能及時排查生產風險，保障產品質量穩定。

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標簽：熱原檢測宿主細胞殘留DNA檢測內毒素檢測支原體檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

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