熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優點,它在監控熒光納米材料的穩定性上還具有以下幾個優勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細胞分化導致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響;(2)很多常見的發光材料的熒光壽命都遠遠大于細胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾;(3)發光材料的熒光壽命和其材料的穩定性密切相關,熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應材料的化學穩定性。熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術。生物發光與熒光成像相同點是都需要對細胞進行標記。珠?;瘜W熒光壽命成像怎么樣
熒光壽命成像是熒光基團在通過發射熒光光子返回基態之前在其激發態下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發態停時間不同,大多數生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經典方法為點對點的時間相關單光子計數(TCSPC),但由于過去檢測硬件的局限和復雜的使用而沒有被普遍地應用于科學研究。隨著技術的發展,在顯微鏡視野內進行超快速全像素熒光壽命信號采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優點:不受染料濃度的影響,無論染色或免疫熒光的效率高或低,熒光壽命都能呈現一致的數據,這意味著更少的實驗數量和重復性更好的實驗結果。不受光漂白的影響,熒光發射時間不受激發光強度的影響,因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。珠海顯微熒光壽命成像制造熒光壽命成像的優勢是什么?
熒光壽命的測量和熒光壽命成像主要有時間相關單光子計數法(time correlated single photon counting, TCSPC)、門控探測法(time-gated detection)、條紋相機測量法(streak-FLIM)、頻閃技術等四種常見的方法。TCSPC是目前測量熒光壽命的主要技術,同軸脈沖光源發出的脈沖光引起起始光電倍增管產生電信號,該信號通過恒分信號甄別器1啟動時幅轉換器(time-amplitude converter,TAC),時幅轉換器產生一個隨時間線性增長的電壓信號。此外,同軸脈沖光源發出的脈沖光通過激發單色器后到達樣品池,樣品產生的熒光信號再經過發射單色器到達終止光電倍增管,由此產生的電信號經由恒分信號甄別器2到達時幅轉換器并使其停止工作。
熒光壽命成像主要應用領域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細胞等有效分離。熒光團在光譜上非常相似(max 580 vs 573)無法分離,但它們在熒光壽命上差異明顯。作為生物傳感器,如評價藥物/理化條件對細胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍,實現可相互驗證的多維度樣品成像。實現真正的生物動力學分析和功能成像。熒光壽命成像的發展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫學檢測有著重要的意義。熒光壽命成像和生物發光的不同之處是什么?
為什么說熒光壽命成像技術是先進的?熒光壽命成像可以提供熒光強度(光子數)和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發(結合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術,無需解剖或專門制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現深度解析測量。特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復合材料以及其相關的原理探究和設計優化。熒光壽命成像的應用領域有哪些?北京多色熒光壽命成像怎么操作
熒光壽命成像可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。珠?;瘜W熒光壽命成像怎么樣
為什么說熒光壽命成像FLIM相比于熒光強度成像更有優勢?通過熒光強度成像可以獲得熒光分子的空間分布,較為直接和簡便,但是當熒光分子具有相似的頻譜特性,或是同樣的熒光分子在不同環境下時,依賴強度進行成像的方案便無法準確反映信息。與基于光強的成像方式不同,熒光壽命成像FLIM適用于測量熒光分子環境的變化,或是測量分子的運動情況。其結果與熒光分子濃度無關,且不受影響光強的光散射或是光吸收影響,可以精確測量熒光淬滅過程,對生物分子微環境進行定量測量。熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。珠海化學熒光壽命成像怎么樣
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