熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發光強度和光漂白影響等優點。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導及調控,蛋白間的相互作用等生物研究發揮著很大作用。利用熒光壽命成像顯微鏡技術可實現可以實時監控發光納米顆粒在活細胞內的穩定性。在過去的十年中,光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫學的迅速發展,共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環境。安徽動物熒光壽命成像多少錢
影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?溫度影響:一般說來,熒光隨溫度升高而強度減弱,溫度升高1℃,熒光強度下降1~10%不等。測定時,溫度必須保持恒定。PH值影響:PH 值影響物質的熒光,應選擇較佳PH制備樣品。光分解對熒光測定的影響: 熒光物質吸收紫外可見光后,發生光化學反應,導致熒光強度下降。因此,熒光分析要采用高靈敏度的檢測器,而不是用增強光源來提高靈敏度。測定時,用較窄的激發光部分的狹縫,以減弱激發光。同時,用較寬的發射狹縫引導熒光。熒光分析應盡量在暗環境中進行。熒光壽命成像這種技術相對較新,涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。湖南紅外熒光壽命成像供貨商熒光壽命成像可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。
熒光壽命成像的優勢是什么?熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優點;不需要考慮跳色的影響,從而免去了計算和去除跳色雜質信號的麻煩;去除跳色雜質的準確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設計和控制、以及跳色信號估算的算法,這些因素使得通過穩態光強度測量熒光壽命成像的精確度在很多時候受到質疑。穩態光強度的熒光壽命成像測量很容易受熒光標記光漂白或是激發光散射背景的影響,而這些因素對FLIM-FRET的測量影響相對較低。熒光壽命成像可以定量的區分參與FRET和沒有參與FRET的分子數量,這樣深入的定量分析是穩態光強度方法做不到的。
熒光壽命成像有什么作用?熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。時間域測量方法涉及用短光脈沖照射樣品(比色皿、細胞或組織),然后隨時間測量發射強度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測方法可用于壽命測量,其中時間相關單光子計數(TCSPC)可實現簡單的數據收集和增強的定量光子計數。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調制。在該方法中,發射發生在與入射光相同的頻率處,并且隨著激發光兼有相位延遲和振幅的變化(解調)。壽命測量不需要波長比率探針來提供眾多分析物的定量測定。壽命法通過使用光譜位移探針擴展了分析物濃度范圍的靈敏度。熒光壽命成像能夠對不同種類或處于不同狀態的生物組織提供更好的對比度。
熒光壽命成像在生命科學研究中的應用:自發熒光FLIM被普遍應用于非標記生物成像領域。所謂自發熒光,即生物細胞本身便包含熒光分子,稱為內源性熒光分子團。FLIM通過對自發熒光分子團(如NAD(P)H)熒光壽命的考察,可以實現細胞代謝的監測。這種方案無需人為對樣品加入熒光試劑便可以發射熒光,有效減少了熒光染料對樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結合及染料對生理性能的干擾影響。外源分子探針FLIM借助于外部熒光染料的注入以產生熒光。如今,為了利用FLIM對物理條件(包括粘度、溫度、酸度和氧化作用)的敏感性,已經開發出了許多適用于體內和體外應用的光學探針。為什么說熒光壽命成像FLIM相比于熒光強度成像更有優勢?廣東生物熒光壽命成像研發
熒光壽命成像技術是怎么運作的?安徽動物熒光壽命成像多少錢
熒光壽命顯微成像技術(FLIM)具有對生物大分子結構、動力學信息和分子環境等進行高分辨高精度測量的能力,因此其重要性日漸提升,被普遍地應用于生物學研究及臨床診斷等領域。熒光壽命成像的發展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫學檢測有著重要的意義。熒光的特性包含有:熒光激發和發射光譜、熒光強度、量子效率、熒光壽命等,其中,熒光壽命是指熒光分子在激發態上存在的平均時間(納秒量級)。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間,因此,測量熒光壽命需要極快響應時間的探測器。安徽動物熒光壽命成像多少錢
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