熒光壽命成像是熒光基團在通過發射熒光光子返回基態之前在其激發態下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發態停時間不同,大多數生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經典方法為點對點的時間相關單光子計數(TCSPC),但由于過去檢測硬件的局限和復雜的使用而沒有被普遍地應用于科學研究。隨著技術的發展,在顯微鏡視野內進行超快速全像素熒光壽命信號采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優點:不受染料濃度的影響,無論染色或免疫熒光的效率高或低,熒光壽命都能呈現一致的數據,這意味著更少的實驗數量和重復性更好的實驗結果。不受光漂白的影響,熒光發射時間不受激發光強度的影響,因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。熒光壽命成像的優勢是什么?江蘇開放式熒光壽命成像生產
熒光壽命成像技術是怎么運作的?通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。可顯示單指數或多指數熒光衰減。數值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測到的光子數)。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,FLIM-FRET為內部參照—這一特點減少了基于強度測量FRET時的很多缺點。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達水平)具有普遍的不變性。使用基于強度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經歷FRET的基本假設。通常情況并非如此。杭州動物熒光壽命成像哪個牌子好熒光成像技術可以用于手術中神經保護。
熒光壽命成像分析是什么?熒光壽命是用于幾種生物測定的穩健參數。它有可能替代傳統的測量技術,如吸收法、冷光法或熒光強度法。熒光團物理化學環境的任何變化都會導致熒光壽命的改變。可通過各種機制來研發基于壽命的分析,例如簡單的結合測定,涉及到兩個組分的結合(一個被熒光標記)而引起FLT的變化。另一種機制是猝滅釋放型測定,涉及大量過量存在的猝滅物質,其具有低而有限的熒光。一旦熒光化合物被釋放(通過酶促反應或與互補DNA結合),系統的壽命就會改變。FLT可與FRET(熒光共振能量轉移)分析結合用于能量轉移效率測量。
熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優點,它在監控熒光納米材料的穩定性上還具有以下幾個優勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細胞分化導致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響;(2)很多常見的發光材料的熒光壽命都遠遠大于細胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾;(3)發光材料的熒光壽命和其材料的穩定性密切相關,熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應材料的化學穩定性。熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術。熒光壽命成像可用于多種生物應用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、DNA芯片分析等。
熒光壽命成像的優勢:通過熒光壽命來進行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時間,而且降低了激光對樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進行參數調節。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。熒光壽命是熒光分子在激發態停留的時間,這個時間可以反映熒光分子的內在屬性和所處的微環境,是一個很有用的工具。以往,熒光壽命的測量和計算是件非常復雜和耗時的工作,只有少數專業的科學家關注和使用該工具。傳統的多色成像實驗根據光譜差異來設計,會有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會造成樣品的光損傷。熒光壽命成像具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優點。天津多色熒光壽命成像怎么用
生物發光與熒光成像相同點是都需要對細胞進行標記。江蘇開放式熒光壽命成像生產
熒光壽命成像技術用于表征DNA壓縮和基因活性。研究團隊發展了熒光壽命成像技術(FLIM),表征DNA壓縮的動態過程,克服了以往方法的局限性。研究團隊提出了兩種精確測量DNA壓縮程度的FLIM分析方法。第一種方法基于加入DNA的熒光探針的熒光壽命與其局部微環境折射率之間的逆二次方關系,熒光探針的壽命隨DNA壓縮密度而變化,從而可表征DNA壓縮程度。第二種方法是將熒光標記的核苷酸整合到DNA鏈中,通過一種叫做熒光共振能量轉移(FRET)的技術獲得其熒光壽命值的變化,從而反映出DNA的壓縮程度的動態變化過程。細胞培養結果證明,兩種FLIM分析方法都可以成功表征DNA壓縮的動態過程。江蘇開放式熒光壽命成像生產
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