羥甲基化DNA免疫沉淀測序（HydroxymethylatedDNAImmunoprecipitationSequencing，hMeDIP-Seq）是通過5hmC特異性抗體富集羥甲基化的DN**段，然后結(jié)合高通量測序技術(shù)在全基因組水平上以較小的數(shù)據(jù)量，快速、高效地尋找羥甲基化區(qū)域。可廣泛應(yīng)用于羥甲基化與疾病關(guān)系研究以及羥甲基化在胚胎發(fā)育過程中的研究。樣本要求：基因組DNA:>=3ug；樣品濃度>50ng/ul；無RNA和蛋白污染建庫測序：測序策略：IlluminaHiSeq,PE150;測序深度：20-30Mreads。信息分析：基于全基因組范圍的羥甲基化分析，數(shù)據(jù)質(zhì)控，Peak鋒Calling，Peak鋒在基因組、染色體、功能元件上的分布，多樣本羥甲基化差異聚類，差異羥甲基化DMR鑒定及相關(guān)基因的功能分析，結(jié)合項(xiàng)目背景和科學(xué)問題的數(shù)據(jù)亮點(diǎn)挖掘。焦磷酸測序能提供雜合子缺失及細(xì)菌和病毒分型等技術(shù)服務(wù)。山東WGBSDNA甲基化口碑推薦

亞硫酸氫鹽測序PCR(BSP)：這種方法一度被認(rèn)為是DNA甲基化分析的金標(biāo)準(zhǔn)。它的過程如下：經(jīng)過亞硫酸氫鹽處理后，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增目的片段，并對PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆測序，將序列與未經(jīng)處理的序列進(jìn)行比較，判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。這種方法可靠，且精確度高，能明確目的片段中每一個(gè)CpG位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)，但因?yàn)樯婕暗綔y序，其結(jié)果準(zhǔn)確但要求克隆時(shí)所挑克隆較多，操作繁瑣，不易大批量操作。另外，甲基化程度的定量依賴于挑選克隆的數(shù)目，因此這種方法只能算得上是一種半定量的技術(shù)方法。目前一般會先用BSP找到甲基化位點(diǎn)，然后根據(jù)甲基化位點(diǎn)設(shè)計(jì)MSP引物，進(jìn)行相應(yīng)PCR條件摸索，以用于大量樣本的篩選。江蘇TAB-SeqDNA甲基化服務(wù)甲基化驗(yàn)證是甲基化研究必不可少的一環(huán)。

羥甲基化DNA免疫沉淀測序（HydroxymethylatedDNAImmunoprecipitationSequencing，hMeDIP-Seq）是通過5hmC特異性抗體富集羥甲基化的DN**段，然后結(jié)合高通量測序技術(shù)在全基因組水平上以較小的數(shù)據(jù)量，快速、高效地尋找羥甲基化區(qū)域。可廣泛應(yīng)用于羥甲基化與疾病關(guān)系研究以及羥甲基化在胚胎發(fā)育過程中的研究。技術(shù)優(yōu)勢：從項(xiàng)目背景了解、協(xié)助方案設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)材料選取、建庫測序，到數(shù)據(jù)分析每個(gè)項(xiàng)目有特定的科學(xué)問題；需要專業(yè)、有價(jià)值的建議；科學(xué)、縝密的設(shè)計(jì)及時(shí)高效的溝通；以保障高質(zhì)量研究成果

**預(yù)防和***的一個(gè)手段是通過去甲基化恢復(fù)某些關(guān)鍵的抑*基因或DNA修復(fù)基因的活性，目前研究**多的是DNMTs抑制劑，它通過抑制DNMT活性以逆轉(zhuǎn)異常的DNA甲基化。**個(gè)表型修飾藥物為5-azacytidine及其類似物5-aza-2'-deoxycytidine（5-aza-CdR），這類藥物已經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)用于白血病前骨髓增生異常綜合征的***。5-aza-CdR是胞嘧啶的類似物，在DNA復(fù)制過程中可以摻入到DNA鏈中，一方面它可以降低DNA接收甲基的能力，另一方面它抑制DNMT活性，導(dǎo)致DNA甲基化水平的降低。體外和體內(nèi)試驗(yàn)均表明，5-aza-CdR具有降低超甲基化的抑*基因甲基化水平從而抑制**的能力，臨床表明應(yīng)用5-aza-CdR可提高部分IV期小細(xì)胞肺*患者生存率，但該藥也存在著不可忽視的毒副作用（如特異性不強(qiáng)，不能針對某一特定抑*基因進(jìn)行靶向***；高劑量的5-aza-CdR可能誘發(fā)**的轉(zhuǎn)移），因此其在臨床上的應(yīng)用受到了很大限制。也有研究表明，低劑量的As2O3可起到***肝*的目的。焦磷酸測序技術(shù)是甲基化檢測新的金標(biāo)準(zhǔn)。

industryTemplateRRBS用于人、哺乳動物及魚類方向的高水平甲基化研究。山東WGBSDNA甲基化口碑推薦

篩選耐藥的相關(guān)biomaker及表觀調(diào)控機(jī)制。山東WGBSDNA甲基化口碑推薦

熒光定量法（Methylight）：這種技術(shù)是在MSP技術(shù)上發(fā)展起來的，在MSP擴(kuò)增過程中利用熒光染料進(jìn)行定量。TaqMan?探針法的應(yīng)用使得該技術(shù)具有更高的精確性。其原理與SNP檢測類似，針對亞硫酸氫鹽處理之后的DN**段，在甲基化位點(diǎn)上會存在單堿基的差異，根據(jù)這種差異進(jìn)行探針設(shè)計(jì)，隨后進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR，就能夠檢測甲基化的差異。這種方法**的優(yōu)勢在于其高敏感性和較高通量，且無需在PCR后電泳、雜交等操作，減少了污染和操作誤差。但是TaqMan?探針訂購費(fèi)用較高，適用于少數(shù)位點(diǎn)大量樣本篩選。山東WGBSDNA甲基化口碑推薦