原理：在DNA擴增反應中，通過熒光化學物質測定每次PCR循環后產物總量。目的：實現定量而不止是定性分析。通過與內參基因進行對比，對樣品中的特定基因進行相對表達量的計算，以實現定量分析。qPCR的檢測方法有兩種，SYBRGreenl法和TaqMan探針法，下面介紹常用的SYBRGreenl法。原理：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，使其特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。試劑及儀器：Hieff®QpcrSYBR®GreenMasterMix試劑(翌圣)和ABI7500Real-TimeSystem實時熒光定量PCR儀進行qRT-PCR擴增。自聚合酶鏈式反應技術被發明以來，其簡單、可靠、快速、靈敏的質量，PCR是分子生物學中使用的技術。深圳單通道qPCR儀供應商

PCR：Polymerase chain reaction. 是體外模擬生物的DNA 復制。需要DNA 聚合酶，DNA 模板，兩端引物，脫氧核苷酸dNTPs( dATP, ACTP, dGTP, dTTP),以及適當的緩沖體系。PCR 產物的增長形式為２N (如果各種試劑和外部所加條件均理想化，N 是循環數)。實際中，擴增效率不為100％。Real time PCR 是定量PCR 的一種，當然是在PCR 的基礎上發展出來的。（普通）PCR 包含很多因素，屬性，如：試劑，溫度，循環數，程序，PCR 產物（擴增子，amplicon）的量，擴增曲線（擴增子累積曲線），摻錯率，擴增子長度。一般來說，人們關心的是擴增子的量。而real time PCR 主要利用的是擴增曲線（amplification curve）, 循環數；擴增子長度，擴增效率，擴增子多少，也加以考慮。深圳單通道qPCR儀供應商熒光檢測系統可接收熒光信號，每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，熒光信號累積和PCR產物形成是同步。

制備DNA——解交聯和DNA純化現在含有目標蛋白質的染色質片段已分離，需要解交聯并純化DNA。解交聯通常采用高熱孵育和/或消化來完成。注意：此時可以停止ChIP。經過解交聯和/或DNA純化后，可以將樣品于-20°C儲存。定量DNA——測定目標蛋白質-DNA水平在該步驟中，通過qPCR定量純化的DNA產物，通過qPCR，您可以確定目標蛋白是否存在于特定位點。ChIP的qPCR如何定量分析ChIP-qPCR 數據需要針對可變性來源進行標準化，包括染色質數量、免疫沉淀的效率（富集效率）和 DNA 回收率。兩種常用的標準化 ChIP-qPCR 數據方法——Percent Input法和富集倍數法（Fold Enrichmen）。與input相關的ChIP-qPCR數據包括ChIP的背景水平和input染色質的標準化。建議ChIP 實驗重復，盡可能將結果與背景信號和標準誤差一起顯示。

所有儀器的操作都基本一致。設置的時候包括反應板設置（plate setup）和程序設置（program setup）。我們以 ABI StepOne為例，詳細看一下反應設置：A. 首先是實驗目的選擇：定量還是其他。我們命名為“BioTeke”，進行“定量”實驗。B. 實驗方法的選擇：我們選用的比較Ct的SYBR Green方法， Fast程序，以cDNA為模板進行。C. 目的基因的設置：有幾個目的基因和目的基因的名稱。D. 樣品的設置：包括哪個是實驗組，哪個是對照組。以及負對照的設置和生物重復的設置。E. 對照組和內參基因的設置：這個是為后面的定量做準備F. 反應程序的設置：PCR反應程序的設置要根據不同公司的MasterMix。比如BioTeke的95℃ 2分鐘就可以DNA聚合酶（ABI的需要10 分鐘）。循環反應是95℃15秒，60℃15秒的40個循環。溶解曲線程序采用儀器默認設置就可以。或者是儀器說明書上建議的程序。G. 反應體系的設置：A-G這五個步驟簡單設置好，可以保存，修改反應程序或者立刻進行反應。

qPCR面對小的差異較弱，dPCR則可識別差異較小的拷貝數。

染料法是指在qPCR反應體系中加入一種與雙鏈DNA分子結合的熒光染料，包括SYBR®Green I、BEBO和LC Green TMI等染料，它們可以與雙鏈DNA（double strands DNA，dsDNA）的小溝非特異性結合，激發較強的熒光產生。經熒光定量PCR儀器檢測后，對核酸進行定性和定量分析。qPCR 染料法原理:這種方法的優點是，需要一對特異性引物，操作簡單、檢測成本低。缺點是由于熒光染料非特異結合dsDNA產物，無法正確區分目的產物，尤其是染料結合引物二聚體易產生錯誤的擴增曲線，易形成誤判。雖然在PCR擴增程序后添加熔解曲線分析，可以方便判斷生成的熒光擴增曲線是否屬于目的產物，但是對于高靈敏度要求的實驗來說，染料法并不是比較好的選擇。與標準 PCR 一樣，SYBR Green 方案由變性、退火和延伸階段組成。深圳單通道qPCR儀供應商

PCR 反應中通過控制溫度變化使得核酸分子重復地解鏈與延伸，從而實現對目的片段的指數擴增。深圳單通道qPCR儀供應商

Quantagene q225 系列熒光定量PCR 43分鐘完成實驗，再加3分鐘做完熔解曲線需43分鐘即可完成一個40循環的常規qpcr實驗。DNA熔解曲線的檢測快可在3分鐘內完成。使用快速試劑，30個熱循環的檢測更可縮短至20分鐘。精密設計的加熱塊和孔板q225的加熱塊經過精密設計，能夠很大程度地貼合孔板形狀，實現高效的熱傳導，使得在加熱塊達到預定溫度后反應溶液也能在短時間內達到相同溫度，反應溶液溫度更為均一。快速循環，穩定溫度 q225 出色的熱循環系統設計使得40 個循環的常規 qPCR 可以在短短43 分鐘內輕松完成，讓您的工作效率獲得質的提升。整個實驗過程中溫度穩定，不受實驗時間延長而導致的機器內部背景溫度上升的影響。深圳單通道qPCR儀供應商

廣州雙螺旋科學儀器有限公司是一家儀器儀表批發;商品批發貿易（許可審批類商品除外）;商品零售貿易（許可審批類商品除外）;教學設備的研究開發;辦公設備耗材批發;生物技術開發服務;生物技術推廣服務;計算機批發;生物技術轉讓服務;農業科學研究和試驗發展;醫學研究和試驗發展;自然科學研究和試驗發展;水處理設備的研究、開發;食品科學技術研究服務;環保設備批發;辦公設備批發;的公司，是一家集研發、設計、生產和銷售為一體的專業化公司。公司自創立以來，投身于數字PCR，純水機，病理切片機，倍性分析儀，是精細化學品的主力軍。雙螺旋科學儀器致力于把技術上的創新展現成對用戶產品上的貼心，為用戶帶來良好體驗。雙螺旋科學儀器創始人姜艷，始終關注客戶，創新科技，竭誠為客戶提供良好的服務。