免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）是一種利用抗體與特定蛋白質結合的特性，從復雜樣本中分離和純化目標蛋白質的實驗方法。這項技術在生物醫學研究中有著廣泛的應用場景，以下是一些主要的應用領域：
1. 蛋白質相互作用分析：通過免疫沉淀技術，研究人員可以研究蛋白質之間的相互作用，揭示蛋白質復合物的組成以及它們在細胞內的功能和調控機制。
2. 抗體藥物開發：免疫沉淀技術可以用于研究抗體藥物與其靶標蛋白的結合特性，評估抗體藥物的親和力和特異性，指導抗體藥物的設計和優化。
3. 蛋白質表達水平分析：通過比較不同條件下的免疫沉淀結果，可以評估目標蛋白的相對量，進而研究蛋白質的表達調控。
4. 染色質免疫沉淀（ChIP）：這是一種特殊的免疫沉淀技術，用于研究蛋白質與DNA的相互作用，如轉錄因子或組蛋白修飾與基因組特定區域的結合情況。
5. RNA免疫沉淀（RIP）：類似于ChIP，RIP用于研究RNA結合蛋白與RNA分子之間的相互作用。
免疫沉淀純化所得抗原量低是什么原因？上海蛋白免疫沉淀外包公司
ChIP（染色質免疫沉淀）實驗是一種用于研究蛋白質與DNA相互作用的技術。以下是ChIP實驗的實驗方法概述：
1. 交聯：將細胞與交聯劑（如1%甲醛）孵育，通常在室溫下進行10-15分鐘。
2. 終止交聯：添加甘氨酸以終止交聯反應，孵育5分鐘。
3. 收集細胞：通過離心收集細胞，并用PBS洗滌以去除交聯劑。
4. 細胞裂解：使用裂解緩沖液裂解細胞，釋放染色質。
5. 染色質剪切：使用超聲波或酶消化將染色質剪切成適當大小的片段。
6. 免疫沉淀：將剪切后的染色質與特異性抗體孵育，然后添加蛋白A/G磁珠。
7. 洗滌：用低鹽、高鹽和LiCl洗滌液洗滌磁珠，去除非特異性結合物。
8. 洗脫：用洗脫緩沖液洗脫DNA。
9. 逆轉交聯：用蛋白酶K處理，然后在65°C下加熱過夜以逆轉交聯。
10. DNA純化：使用商業試劑盒或標準酚/氯仿方法純化DNA。
11. 分析：使用qPCR分析富集的DNA，或進行測序以確定蛋白質結合位點。
蘇州anti Flag免疫沉淀磁珠現貨免疫沉淀技術的綜述。
免疫沉淀純化所得抗原純度低一般有多種原因：
1. 非特異性蛋白污染
如果洗脫所得抗原純度較低，則有幾種方法可以進行優化。在結合或洗滌緩沖液中加入去污劑或其他可以降低非特異性結合的組分。使用普通微珠預純化樣本還可以降低非目標分子的共純化。此外，還可以使用無關蛋白 (如BSA) 封閉微珠 。
2. 抗體污染
使用蛋白A、G或A/G的經典免疫沉淀實驗中會出現抗體與抗原共洗脫的情況。如果共洗脫會影響下游分析，則需要使用抗體通過共價連接固定至微珠的方法進行實驗，如Pierce 直接 IP 或交聯 IP 的形式。
免疫沉淀IP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結構 (直徑 50-150 μm) 可以結合抗體 (繼而結合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結合抗體，而不需借助特殊的專業設備。瓊脂糖珠呈多孔結構，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質相互接觸，具有更高的結合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結合能力，但每體積的磁珠數量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結合表面積滿足高容量的抗體結合。
簡而言之，瓊脂糖珠的結合能力較強，而磁珠在得率，可重復性以及自動化方面有明顯的優勢。
免疫沉淀技術IP的優缺點是什么？
RNA免疫沉淀技術（RIP）是一種研究RNA與蛋白質相互作用的重要方法，其應用領域主要包括：
1. 轉錄后調控研究：RIP技術可以幫助研究者了解RNA在轉錄后水平如何被調控。
2. 表觀遺傳調控：RIP技術用于研究RNA結合蛋白（RBPs）在表觀遺傳調控中的作用。
3. 非編碼RNA功能研究：RIP技術可以用來研究長非編碼RNA（lncRNA）、miRNA和其他小RNA的種類，以及它們如何與蛋白質相互作用來調控基因表達。
4. RNA病毒研究：RIP技術也可用于研究RNA病毒與其宿主細胞內蛋白質的相互作用，進而了解病毒復制和致病機制。
5. RNA修飾和甲基化研究：RIP技術結合其他技術如m5C-RIP-seq，可用于研究RNA甲基化修飾及其在病理過程中的作用。
6. RNA定位和穩定性：通過RIP技術，研究者可以探索特定RNA在細胞內的定位以及它們如何被穩定或降解。
7. RNA-蛋白質復合物的鑒定：RIP技術可以用來鑒定與特定RNA結合的蛋白質，從而揭示RNA-蛋白質復合物的組成。
8. 疾病相關RNA研究：RIP技術在疾病相關RNA的研究中也有應用。
免疫沉淀技術IP實驗步驟。溫州anti Flag免疫沉淀磁珠哪個公司好用
免疫沉淀技術的實驗方法。上海蛋白免疫沉淀外包公司
Co-IP（Co-Immunoprecipitation，共免疫沉淀）的實驗方法通常包括以下步驟：
1. 細胞培養與裂解：細胞在適宜的培養條件下生長到適當的密度。
蛋白質分離：裂解后的細胞混合物通過離心去除未破碎的細胞碎片和未裂解的細胞。收集上清液
2. 抗體的添加：將特異性抗體（針對目標蛋白質的抗體）加入到裂解物中。
3. 免疫復合物的形成：抗體與目標蛋白結合后，形成免疫復合物。
4. 親和介質的使用：向混合物中添加蛋白A或蛋白G結合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）。
5. 免疫復合物的捕獲：將混合物與珠子孵育一段時間后，使用磁鐵或離心的方法將珠子收集起來，同時捕獲了與之結合的免疫復合物。
6. 洗滌：洗滌珠子以去除未特異性結合的蛋白質和其他分子。
7. 洗脫：使用適當的緩沖液將免疫復合物從珠子上洗脫下來，常用的緩沖液包括SDS樣品緩沖液，用于后續的電泳分析。
8. 蛋白質分析：洗脫的蛋白質可以通過SDS-PAGE凝膠電泳、Western blot、質譜分析等方法進行進一步分析。
9. 實驗對照：實驗中應包括陽性對照和陰性對照，以確保實驗結果的可靠性。
10. 數據分析：對實驗結果進行分析，確認目標蛋白是否成功沉淀，并鑒定任何可能的相互作用蛋白。
上海蛋白免疫沉淀外包公司