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固定的目的①保持其原有狀態：使細胞內的蛋白質、脂肪、糖、酶等成分轉變為不溶性物質，迅速防止、細胞的死后變化，防止自溶與，防止細胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態結構，使之盡量保持生前的狀態和結構。②以便染色后易于鑒別和觀察：不同成分對染料有不同的親和力，以便染色后易于鑒別和觀察。③使塊硬化，便于制作薄片（塊在脫水、包埋、切片、染色等過程中不易損壞）。（3）固定液固定液種類：一類是單純固定液，即只有一種試劑；另一類是混合固定液，由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液，應有下列特性，首先，有強滲透力，能迅速的滲入內部；其次，不使過度收縮或膨脹，并能使內欲觀察的成分得以凝固為不溶性物質；能使達到一...

靜置25分鐘后把酒精倒干，用吸水紙吸出多余的酒精，然后配壓縮膠，同樣的操作，關鍵是梳子要插得快，要小心梳子下產生氣泡，然后靜置30分鐘。如果是當天跑膠，我會等上層膠凝2個小時再用，但要注意防干燥縮水，可以在一個小時的時候沿著梳子上緣加點電泳液。所以我一般提前一晚制膠，泡于純水或者電泳液里置于4度冰箱暫存。三、蛋白電泳1、上樣前準備把膠組裝到電泳芯上，注意密閉性(否則漏液)，如果內槽漏液就不是勻強電場了，條帶可能就不是一條直線。然后內槽倒滿電泳液，拔梳子，這一步要小心，梳子要兩邊一起緩緩往上拔出，然后觀察泳道內有無脫落的膠粒或者膠絲，有的話用1毫升注射器吸出。然后從冰箱取出蛋白樣品，解凍。準備振...

實驗樣本分類實驗一般采取樣本有：血液樣本、樣本和細胞樣本。通常，樣本采集后，應立即用等滲溶液（PBS或生理鹽水）盡量把血液漂洗干凈（除非血液也是分析對象），用濾紙或紗布吸干，把樣本分切成幾分，每份的體積約2個黃豆大小，每份用一個管子裝。血液樣本的采集應根據不同實驗的要求，將會采取不同策略。血清樣本：全血中不加抗凝劑，血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黃色透明液體。（全血標本室溫放置2小時3000rpm/min離心15min）血漿樣本：全血中加抗凝劑，血液凝固后取出的含凝血因子的淡黃色透明液體。（可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8℃，3000rpm/min離心15min）如...

METTL3能夠促進肺腺細胞的生長、生存和侵襲，但還不清楚它是否作為m6A調節器或效應器發揮作用[25]。在急性髓細胞白血病（AML）患者中，m(6)A調控基因的突變或拷貝數變化與TP53突變存在密切聯系，且m(6)A調控基因的改變與AML不良預相關[26]。此外，FTO在AML中高表達，它通過降低mRNA轉錄本中的m(6)水平，調節ASB2和RARA等靶點的表達，增強了白血病基因介導的細胞轉化和白血病形成，并抑制全反式維甲酸(ATRA)誘導的AML細胞分化[27]。在脂肪形成過程中，FTO表達與m6A水平成負相關，促進脂肪形成[3]。在膠質細胞瘤樣細胞中，ALKBH5通過lncRNAFOXM...

科手術設備|細胞/組織支持系統|膜片鉗|輔助設備|其它常用耗材燒杯|漏斗|量筒|廣口罐|研缽和研杵|手套|移液管|移液器(Pipette)單道手動移液器|單道電動移液器|多道手動移液器多道電動移液器|正置換移液器|瓶口分液器吸頭(Tips)濾芯吸頭(滅菌)|濾芯吸頭(未滅菌)|普通吸頭(滅菌)普通吸頭(未滅菌)|多道移液器吸頭液體工作站吸頭|其它瓶(Bottle)離心瓶|稱量瓶|存儲瓶|比重瓶|血清瓶|滴瓶吸氣瓶|細胞培養瓶|培養基瓶|其它瓶(Flask)藍蓋瓶|燒瓶|平底燒瓶|克氏(長頸)燒瓶|碘測定燒瓶|蒸餾燒瓶|容量瓶|過濾瓶|其它管(Tube&Vial)離心管|微離心管|樣品儲存管|凍...

固定的目的①保持其原有狀態：使細胞內的蛋白質、脂肪、糖、酶等成分轉變為不溶性物質，迅速防止、細胞的死后變化，防止自溶與，防止細胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態結構，使之盡量保持生前的狀態和結構。②以便染色后易于鑒別和觀察：不同成分對染料有不同的親和力，以便染色后易于鑒別和觀察。③使塊硬化，便于制作薄片（塊在脫水、包埋、切片、染色等過程中不易損壞）。（3）固定液固定液種類：一類是單純固定液，即只有一種試劑；另一類是混合固定液，由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液，應有下列特性，首先，有強滲透力，能迅速的滲入內部；其次，不使過度收縮或膨脹，并能使內欲觀察的成分得以凝固為不溶性物質；能使達到一...

中華文化促進會文化創新與傳播委員會會長朱建聲、西安海棠學院院長馮居秦、西安交通大學人文學院EDP中心主任、中華風采人物媒體社長王天保、西安市EMBA助企商會會長張西安、陜西省糖尿病協會副會長張麗、陜西省養生協會會長李靖、陜西省職業經理人協會名譽會長劉志超、西藏鷹山科技集團董事長張沛、西安天歌干細胞健康管理中心總經理楊海軍和團隊及各行各業企業界朋友、受益者近200人參與了活動。西安天歌干細胞健康管理有限公司總經理楊海軍介紹了成立一年來的工作情況和未來的發展布局。隨后，天歌干細胞健康管理中心負責人分別同中華文化促進會文化創新與傳播委員會會長朱建聲；西安市（EMBA助企商會）/西安市EMBA商會會長...

常見的有理染色、WesternBlot、PCR等），實驗儀器是否需要預約使用。如果需要外送公司檢測，需要提前聯系好商家，以及了解清楚樣本如何獲取，如何運輸。飼養動物及干預動物購買后需要將時間節點提前規劃好，比如，周需要做什么？測量體重？觀察飲食？測量需要的指標？中間有無特殊操作？比如灌胃、測量體重、做CT檢測、取血？……第幾周取材？取材需要哪些？預實驗方案就要提前設計清楚以上內容。取材及樣品準備取材需要提前到動物房禁食、稱體重、取出動物、手術的、固定所需要的試劑和EP管，WesternBlot和PCR所需要的樣本儲存條件。比如凍存管、EP管，是否需要冰塊？是否需要液氮？取材當天需要多少人？是否...

中華文化促進會文化創新與傳播委員會會長朱建聲、西安海棠學院院長馮居秦、西安交通大學人文學院EDP中心主任、中華風采人物媒體社長王天保、西安市EMBA助企商會會長張西安、陜西省糖尿病協會副會長張麗、陜西省養生協會會長李靖、陜西省職業經理人協會名譽會長劉志超、西藏鷹山科技集團董事長張沛、西安天歌干細胞健康管理中心總經理楊海軍和團隊及各行各業企業界朋友、受益者近200人參與了活動。西安天歌干細胞健康管理有限公司總經理楊海軍介紹了成立一年來的工作情況和未來的發展布局。隨后，天歌干細胞健康管理中心負責人分別同中華文化促進會文化創新與傳播委員會會長朱建聲；西安市（EMBA助企商會）/西安市EMBA商會會長...

外泌體作為藥物載體由于特殊的結構和循環方式，外泌體作為藥物運輸的載體具有獨特的優勢。例如外泌體的尺寸分布能夠增強滲透滯留效應，從而有選擇性地深入組織;其外層磷脂雙分子層可以保護內容物不受各種生物酶的影響，維持各種生物分子的活性;外泌體普遍存在于各種體液和組織中，其體積小，結構、組成與細胞膜類似，導致外泌體可以在避開免疫系統監督的同時深入組織內部，有較好的生物相容性;當采用內源外泌體時，能明顯降低其他藥物載體可能引起的有害免疫反應;除此之外，某些細胞來源或經特殊修飾過的外泌體具有良好的特異性，可以與特定的或組織結合。因此，載藥成為外泌體研究的一個重要分支，具有良好的應用前景。在外泌體中引入藥物的...

是整體甲基化進程所必須的[2]。FTO是ALKB家族的成員，作為個被發現的去甲基酶，可影響剪切因子SRSF2的RNA結合能力，進而調控pre-mRNA的剪切加工過程[3]。目前已發現FTO調節異常與肥胖、大腦畸形和生長遲緩相關，揭示m6A可能對這些疾病具有重要的調節功能[4-6]。ALKBH5是ALKB家族中被發現具有去甲基作用的另一個成員，以RNaseA敏感的方式與核小斑共定位，它可直接催化m6A-甲基化腺苷去除甲基而不同于FTO的氧化去甲基化[7].此外，ALKBH5和它的去甲基化活性影響新生mRNA合的成和剪切效率[7]，且ALKBH5敲除雄性小鼠表現出精子發生異常，這可能是精子發生相關...

用伊紅乙醇液對比染色1~3min。（4）將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色，然后放入無水乙醇中3~5min，吸干后將切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5min。3、觀察在鏡下可見卵巢呈扁橢圓形，表面為單層扁平上皮細胞或單層立方上皮，卵巢實質分為皮質和髓質。可見上皮，原始卵泡和生長卵泡。卵巢組織中各發育階段卵泡及卵巢基質的形態結構清晰可見,細胞核呈藍紫色,細胞質及間質成分呈淺紅色,卵泡中卵母細胞、卵泡細胞、透明帶均清晰可見。注意事項1.取材注意事項（1）取材動作要迅速，不宜作太久的拖延以免組織細胞的成分、結構等發生變化。（2）切片材料應根據需要觀察的部位進行選擇，盡可能不要損傷所需要的部分。（3）切...

建立疾病模型的目的是為了防治人類疾病。因此，疾病模型研究結果的可靠程度取決于模型與人類疾病的相似或可比擬的程度。接下來就讓上海研錄帶您了解相關知識。一個好的疾病模型應具有以下特點：①能夠再現所要研究的人類疾病，動物疾病表現應該與人類疾病相似；②動物能重復產生該疾病，盡可能能在兩種動物體內復制該病；③動物背景資料完整，實驗動物合格，生命周期要滿足實驗需要;④動物要價廉、來源充足、便于運送；⑤盡可能選用小動物。生物醫學科研專業設計中常要考慮如何建立動物模型的問題，因為很多闡明疾病及療效機制的實驗不可能或不應該在患者身上進行。常要依賴于復制動物模型，但一定要進行周密設計，設計時要遵循下列一些原則：(...

RNA甲基化修飾（m6A）研究RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60%以上，而N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）是高等生物mRNA和lncRNAs上為普遍的修飾。目前發現microRNA，circRNA,rRNA,tRNA和snoRNA上都有發生m6A修飾。m6A修飾主要發生在RRACH序列中的腺嘌呤上，其功能由“編碼器(Writer)”、“消碼器(Eraser)”和“讀碼器(Reader)”決定[1]。“編碼器(Writer)”即甲基轉移酶，目前已知這個復合物的成分有METTL3，METTL14,WTAP和KIAA1429；而ALKBH5和FTO作為去甲基酶（...

m6A研究又有新手段了？趕緊來了解一下吧！欄目：研究動態發布時間：2019-08-14RNA甲基化m6A是如今的研究熱點之一,Cell上新發表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測mRNAm6A水平的Resource文章......RNA甲基化m6A是如今的研究熱點之一，目前主要的研究思路包括差異表達的write，reader和eraser基因分析；m6A抗體檢測全轉錄組甲基化水平；分析m6A甲基化水平變化的靶基因和下游機制研究。而在7月25日的Cell上新發表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測mRNAm6A水平的Resource文章，小編時間和大家分享一下。作者開發這一方法的前提是有研究報道了Maz...

RNA甲基化修飾（m6A）研究RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60%以上，而N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）是高等生物mRNA和lncRNAs上為普遍的修飾。目前發現microRNA，circRNA,rRNA,tRNA和snoRNA上都有發生m6A修飾。m6A修飾主要發生在RRACH序列中的腺嘌呤上，其功能由“編碼器(Writer)”、“消碼器(Eraser)”和“讀碼器(Reader)”決定[1]。“編碼器(Writer)”即甲基轉移酶，目前已知這個復合物的成分有METTL3，METTL14,WTAP和KIAA1429；而ALKBH5和FTO作為去甲基酶（...

制作該模型的方法為大鼠腹腔麻醉消毒后選取腹部正中切口打開腹腔長約2cm，尋找盲腸，小心分離其遠端與大腸的系膜，在盲腸遠端1/2處用無菌4號絲線緊緊結扎，并用無菌7號針頭在已結扎盲腸遠端處貫通穿刺，然后把盲腸推回腹腔，關閉腹腔。影響因素多數研究一致認為盲腸結扎位置是CLP模型中死亡率和疾病嚴重程度的主要決定因素。結論為：①結扎25%或以下的盲腸死亡率幾乎為零，為輕度膿毒癥；②結扎50%～60%的盲腸導致術后死亡率為60%，為中度膿毒癥；③結扎75%或以上的盲腸導致小鼠在術后2～3d內全部死亡，為重度膿毒癥。而在不同程度膿毒癥中，死亡主要集中在初的48h內。有研究通過改變盲腸結扎位置和穿刺針直徑來...

建議按照2×106每孔的數量將293T細胞均勻鋪入。(2)第二天：在24小時之內，觀察293T細胞的匯合度在90%~95%之間時，向其中加入DNA-脂質體復合體，DNA-脂質體復合體制備方法如下：a)輕輕混勻LipoMax，根據說明書加入相應量于500μlOpti-MEM無血清培養基中，混合均勻并置于室溫5分鐘。b)在500μlOpti-MEM無血清培養基中稀釋DNA，總質量為15μg按照載體質粒:psPAX2:=4:3:1的比例加入DNA。c)將稀釋后的LipoMax和稀釋后的DNA輕輕混勻，常溫靜置20分鐘，形成DNA-LipoMax復合體。(3)將DNA-LipoMax復合體輕柔地滴加至...

且研究表明HNRNPC通過m6A與RNA結合調控目標轉錄本的豐度和選擇性剪切[9].圖1m6A修飾的酶系統[10]m6A生物學功能越來越多的證據表明m6A修飾在哺乳動物中發揮重要的生物功能。例如，在轉錄水平上調控RNA的穩定性[11]、定位[12]、運輸、剪切[13]和翻譯[14]。ClaudioR.等發現依賴METTL3的pri-miRNA甲基化，會促進DGCR8識別和加工，從而促進microRNA的成熟[15]。此外，m6A識別蛋白HNRNPA2B1促進pri-miRNA加工成pre-miRNA[16]。另外，環狀RNA上m6A的修飾能促進環狀RNA的翻譯[17]。m6A修飾在基因表達調控...

固定的目的①保持其原有狀態：使細胞內的蛋白質、脂肪、糖、酶等成分轉變為不溶性物質，迅速防止、細胞的死后變化，防止自溶與，防止細胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態結構，使之盡量保持生前的狀態和結構。②以便染色后易于鑒別和觀察：不同成分對染料有不同的親和力，以便染色后易于鑒別和觀察。③使塊硬化，便于制作薄片（塊在脫水、包埋、切片、染色等過程中不易損壞）。（3）固定液固定液種類：一類是單純固定液，即只有一種試劑；另一類是混合固定液，由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液，應有下列特性，首先，有強滲透力，能迅速的滲入內部；其次，不使過度收縮或膨脹，并能使內欲觀察的成分得以凝固為不溶性物質；能使達到一...

METTL3能夠促進肺腺細胞的生長、生存和侵襲，但還不清楚它是否作為m6A調節器或效應器發揮作用[25]。在急性髓細胞白血病（AML）患者中，m(6)A調控基因的突變或拷貝數變化與TP53突變存在密切聯系，且m(6)A調控基因的改變與AML不良預相關[26]。此外，FTO在AML中高表達，它通過降低mRNA轉錄本中的m(6)水平，調節ASB2和RARA等靶點的表達，增強了白血病基因介導的細胞轉化和白血病形成，并抑制全反式維甲酸(ATRA)誘導的AML細胞分化[27]。在脂肪形成過程中，FTO表達與m6A水平成負相關，促進脂肪形成[3]。在膠質細胞瘤樣細胞中，ALKBH5通過lncRNAFOXM...

建立疾病模型的目的是為了防治人類疾病。因此，疾病模型研究結果的可靠程度取決于模型與人類疾病的相似或可比擬的程度。接下來就讓上海研錄帶您了解相關知識。一個好的疾病模型應具有以下特點：①能夠再現所要研究的人類疾病，動物疾病表現應該與人類疾病相似；②動物能重復產生該疾病，盡可能能在兩種動物體內復制該病；③動物背景資料完整，實驗動物合格，生命周期要滿足實驗需要;④動物要價廉、來源充足、便于運送；⑤盡可能選用小動物。生物醫學科研專業設計中常要考慮如何建立動物模型的問題，因為很多闡明疾病及療效機制的實驗不可能或不應該在患者身上進行。常要依賴于復制動物模型，但一定要進行周密設計，設計時要遵循下列一些原則：(...

動物模型在科研中有著普遍的應用。首先，它們可以幫助科研人員深入理解的共同性，即不同物種之間存在的共有理變化過程。通過對動物模型的研究，科研人員可以更清楚地了解的發展過程和機制，為人類的檢查提供理論依據。其次，動物模型還為新研發和苗測試提供了的平臺。在研發過程中，科研人員可以通過對動物模型進行處理，觀察其和副作用，為新的臨床試驗提供依據。而在苗測試中，動物模型則可以用來評估苗的性和安全性。此外，動物模型還為科研人員提供了研究人類的跨學科方法。例如，通過比較人類和動物模型的基因組學、蛋白質組學等數據，可以發現與發生相關的關鍵基因和蛋白質，從而為的和檢查提供新的思路。雖然動物模型在科研中發揮了巨大的...

一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點不一樣，前者更容易與氧氣反應，穩定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計劃跑上幾十次的，優先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準備首先強調一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個環節也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優先選1毫米，...

代謝組學的研究對象大都是相對分子量在1000以內的小分子物質，因此常用的血液樣本在取樣后，應小心操作，防止溶血，盡快分離出血清，分置于溫環境下保存。由于用于理實驗的動物采集相對其他樣品的采集，操作更繁瑣，在處理過程中許多細節容易忽略，造成數據不完美（甚至不能用）。因此接下來將重點介紹樣品采集的注意事項及其固定。樣品采集注意事項應新鮮，操作時間盡可能短，否則細胞發生死后變化、自融及現象。是動物心臟還在跳動時采集，樣本取出后在5分鐘以內置于固定液內，避免長時間暴露在空氣環境中。塊盡量小而薄。塊的厚度以不超過5mm為宜，較為理想的厚度為2mm左右，主要目的是使固定液迅速而均勻的滲入塊內部。勿使塊受擠...

METTL3能夠促進肺腺細胞的生長、生存和侵襲，但還不清楚它是否作為m6A調節器或效應器發揮作用[25]。在急性髓細胞白血病（AML）患者中，m(6)A調控基因的突變或拷貝數變化與TP53突變存在密切聯系，且m(6)A調控基因的改變與AML不良預相關[26]。此外，FTO在AML中高表達，它通過降低mRNA轉錄本中的m(6)水平，調節ASB2和RARA等靶點的表達，增強了白血病基因介導的細胞轉化和白血病形成，并抑制全反式維甲酸(ATRA)誘導的AML細胞分化[27]。在脂肪形成過程中，FTO表達與m6A水平成負相關，促進脂肪形成[3]。在膠質細胞瘤樣細胞中，ALKBH5通過lncRNAFOXM...

這種細胞保持著其原始的生物學特性，具有高度的活性和分裂能力。原代細胞在許多生物醫學研究中具有重要地位，包括藥物篩選、疾病模型的建立以及疫苗研發等。原代細胞的獲得通常是通過組織剪切、消化或酶解等方式從機體或組織中分離出來。這些細胞脫離了它們在生物體中的環境，但是仍然保持著其基本的生物學特性，包括細胞膜、細胞核、細胞器以及其他重要的生物分子。原代細胞在未經過傳代培養的情況下，保持著其原始的生物學特性，因此，它們常常被用于藥物篩選、毒理學研究等。同時，由于原代細胞具有高度活性和分裂能力，它們也被用于組織工程和再生醫學中，如皮膚移植、骨頭修復和神經再生等。此外，原代細胞模型在疾病研究中也扮演著重要角色...

如果實驗平臺的儀器需要提前預約，建議提前規劃好使用的時間。反復總結尋找答案在整個預實驗的過程中可能會出現很多問題。比如造模效果欠佳、灌胃操作不當、腹腔注射操作失誤、使用不當等引起動物死亡。每遇到問題都需要自己想辦法解決，可以從導師、師兄師姐、文獻、貼吧、視頻教程等找到答案。比如筆者曾遇到同樣的給，發現有的大鼠得很深，有的大鼠還活蹦亂跳，在反復嘗試調整濃度，給劑量，更換方式，后來才發現是動物體重秤的準度有問題，導致體重秤得不準。因此，需要自己反復琢磨到底是實驗過程中哪一個環節出現問題，逐一排除。也要求在每一個實驗步驟需要標準化，統一化，盡可能的排除干擾因素，這樣方便在遇到問題快的找到答案。同時，...

常見的有理染色、WesternBlot、PCR等），實驗儀器是否需要預約使用。如果需要外送公司檢測，需要提前聯系好商家，以及了解清楚樣本如何獲取，如何運輸。飼養動物及干預動物購買后需要將時間節點提前規劃好，比如，周需要做什么？測量體重？觀察飲食？測量需要的指標？中間有無特殊操作？比如灌胃、測量體重、做CT檢測、取血？……第幾周取材？取材需要哪些？預實驗方案就要提前設計清楚以上內容。取材及樣品準備取材需要提前到動物房禁食、稱體重、取出動物、手術的、固定所需要的試劑和EP管，WesternBlot和PCR所需要的樣本儲存條件。比如凍存管、EP管，是否需要冰塊？是否需要液氮？取材當天需要多少人？是否...

首先，預實驗必須要當做正式實驗來對待（態度要放端正，這是必須的）。預實驗的每一步都需要詳細規劃，多方籌謀。不論是實驗動物的選擇，還是檢測試劑的購買，都盡量和正式實驗統一標準。建議大家先把所有試劑和購買完畢后，再去購買實驗動物。因為動物會長胖，長胖后給劑量就要增加，不僅多花錢，并且還容易影響實驗效果。筆者曾經提前將實驗動物買回，但因為特殊原因沒能購買到造模，終只能忍痛割愛將動物贈送他人，白白虧了一筆血汗錢（那批老鼠在我這兒白吃白喝長得太胖，沒辦法用作造模）。動物及試劑購買首先需要考慮：實驗動物品種、體重、性別、周齡（通常根據既往文獻報道可以獲得答案）、數量（需要考慮到實驗有一定動物死亡率或者動物...