省心省時一些基因編輯鼠模型表型不易發現，需要結合外科手術造模、物理刺激或藥物誘導才能發現表型。專業的手術模型團隊結合成熟穩定的基因修飾鼠平臺和飼養繁育平臺，賽業生物可為您提供一站式“基因編輯鼠模型制備——種群擴繁——手術造模——表型驗證”服務，讓您省心省時。3.專業的技術支持賽業生物專業的小動物外科手術團隊熟練掌握多種模型的制備，具備建立復雜及復合手術疾病模型的能力，可能夠根據您的需求，制定合理的實驗計劃，同時提供及時的項目匯報與售后服務，讓您省事省心。，確保動物福利與質量標準與國際接軌賽業模式動物中心通過ISO9001:2015和AAALAC雙認證，ISO9001:2015認證確保向廣大學者提供的所有產品和技術服務符合國際標準，AAALAC認證表明了賽業生物尊重動物福利和倫理，重視生物安全的負責態度。適用動物品種：大鼠、小鼠。手術疾病模型團隊首席科學家簡介張榮利博士張榮利博士有二十多年小鼠手術疾病模型制備經驗，畢業后先后在中國中醫科學院、清華大學、北京大學及國際學術機構任職，2011年起在美國CaseWesternReserveUniversity工作，任ResearchScientist并擔任心血管生理學實驗室主任，負責基因工程動物的疾病表型發現與新藥臨床前研究。急性肺損傷(acute lung injury，ALI)。北京外包動物模型構建

所用儀器為bio-rad的化學發光凝膠成像系統。結果見圖1中c和d，可以看出，通過免疫印跡(westernblot)的方法證明了gm20541蛋白在小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾中均有表達。實施例2本實施例以小鼠為目標動物，對本發明提供的視網膜色素變性疾病模型的構建方法進行說明，gm20541基因敲除的路線如圖2所示，具體操作如下：基因敲除小鼠獲取步驟：1將與小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有報告基因gfp的表達框、有neo抗性基因的表達框、兩端有同向排列loxp位點的第3外顯子和3’端臂克隆到bac載體(圖2)以用于替換欲敲除的gm20541基因第3個外顯子；2利用dna同源重組技術將gm20541基因中的第3個外顯子替換，得到gm20541基因條件性敲除的小鼠胚胎干細胞；3利用步驟2得到的胚胎干細胞制備得到含gm20541基因敲除細胞的嵌合體小鼠(圖2)；4將步驟3得到的嵌合體小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中篩選出gm20541基因敲除的雜合子小鼠(圖2)。鑒定：實施例2中長距離pcr鑒定陽性子一代鼠的實驗結果，擴增5’端長臂使用引物對gm5’lrf和sa3’r，擴增產物為。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’；sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。結果見圖3中a。云南皮下成瘤動物模型手術合理建立周圍性面癱動物模型對進一步深入研究具有重要意義。

所述外顯子序列為第3外顯子序列。進一步地，在本發明的一些實施方案中，利用cre-loxp基因敲除技術敲除gm20541基因上的第3外顯子序列。上述敲除策略是采用cre-loxp敲除技術敲除gm20541基因。但在其他的實施例中，實現基因敲除的技術手段有很多，例如crispr/cas9技術、人工核酸酶介導的鋅指核酸酶技術(zinc-fingernucleases，zfn)、轉錄因子樣效應物核酸酶技術(transceriptionactivator-likeeffectornucleases,talen)等。因此，在其他的實施例中采用crispr/cas9技術或其他的技術手段敲除gm20541基因，也是屬于本發明的保護范圍。進一步地，在本發明的一些實施方案中，所述目標動物為哺乳動物。進一步地，在本發明的一些實施方案中，所述哺乳動物選自小鼠、大鼠、狗、豬、猴以及猿中的任意一種。需要說明是，本發明所述的目標動物并不限于上述的動物，其他類型的哺乳動物也是可行，無論選用何種動物，只要是具有gm20541基因或其同源基因的動物，均可作為本發明所述構建方法中的目標動物，在其前體細胞中敲除gm20541基因，使其表現出視網膜色素變性性疾病特征，作為視網膜色素變性疾病模型，這也是屬于本發明的保護范圍。第二方面。

結果發現在這些組織中，gm20541均有表達，說明該基因可能在體內發揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達。方法：(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾，充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細胞后，在冰上裂解20min。(3)4℃，16000g離心10min后，取上清轉移至另一干凈離心管，加入50μl的蛋白上樣液，混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后，分別取20μl，160v電壓進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結束后，根據需要，裁剪適當大小的硝酸纖維素膜，按順序鋪上濾紙、膠、硝酸纖維素膜及濾紙，并趕去氣泡，轉膜槽放入冰水浴中，采用恒流，轉膜2h。(6)轉膜完畢后，純水沖洗硝酸纖維素膜一遍，晾干并標記。然后用8％的脫脂牛奶封閉2h。(7)封閉完成后，加入一定量的按一定比例(按照抗體使用說明書)稀釋于封閉液的一抗，4℃孵育過夜。(8)回收一抗，1×tbst緩沖液洗膜4次，每次10min，根據一抗來源，選擇合適二抗，用1×tbst稀釋辣根過氧化氫酶(hrp)標記的二抗，室溫于搖床上孵育2h。(9)二抗孵育結束后，用1×tbst洗膜3次，每次10min，用thermo的elc發光試劑盒檢測蛋白。大腦中動脈(MCA)為臨床上發生腦缺血損傷常見的部位之一。

微波爐中融化后制成1％的瓊脂糖膠。取10μlpcr產物于加樣孔中，120v恒壓瓊脂糖電泳15min.用凝膠成像系統成像。圖4中a上方是gm20541條件性敲除鑒定結果，wt表示野生型對照，條帶大小為223bp；het表示雜合子，有兩個條帶223bp和358bp；sixko表示純合子，條帶大小為358bp。圖4中a下方是six3－cre鑒定結果。six3－cre大小為200bp。根據圖4中a的結果，顯示所采用的鑒定方法可對新生小鼠的基因型進行有效鑒定。其中，gm20541基因敲除純合子小鼠即可作為視網膜色素變性疾病模型(后文用sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子)，并進行相關表型的驗證。(5)rt-pcr實驗分析six3-cre敲除小鼠視網膜中基因敲除效率驗證，方法如下：(a)分別分離野生型和突變型小鼠視網膜組織，置于，加入1mltrizol提取液，室溫20分鐘；(b)加入200μl氯仿，充分混勻，室溫靜置10分鐘；(c)將樣品置于4度離心機，10000轉離心15分鐘；(d)小心吸取上清液，加入等體積異丙醇，充分混勻，10000轉離心沉淀rna；(e)75％乙醇清洗析出的總rna，離心再次沉淀，然后晾干加入depc水溶解；(f)提取的總rna用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。C57BL/6成年鼠肺部通過呼吸機過量通氣損傷模型的建立；湖北小鼠動物模型手術

小鼠膽管結扎誘導炎癥性肝損傷和肝纖維化模型的建立。北京外包動物模型構建

視網膜外網層及其他相關細胞層出現相應病理改變。因此，視網膜前體細胞中的gm20541基因被敲除的動物可以作為視網膜色素變性疾病模型，用于視網膜色素變性性疾病研究等領域中，為該疾病的研究例如發病過程、機制以及相關藥物的篩選提供一種新的模型。進一步地，在本發明的一些實施方案中，敲除gm20541基因序列是指敲除gm20541基因的外顯子序列。敲除gm20541基因序列可以是敲除gm20541基因全長序列，也可以是敲除gm20541基因部分序列例如部分外顯子序列，無論敲除那種類型(部分或全長)的序列，只要是能夠在前體細胞中沉默gm20541基因的表達，使動物表現出視網膜色素變性性疾病相應特征即落入本發明的保護范圍。進一步地，在本發明的一些實施方案中，所述外顯子序列選自第1外顯子、第2外顯子、第3外顯子中的任意一個或多個外顯子序列。在本發明公開的內容基礎上，即在本發明揭示了gm20541基因與視網膜色素變性疾病的相關關系的前提下，本領域技術人員容易想到敲除gm20541基因的任意一個或多個外顯子序列，以使gm20541基因的功能受損，進而得到類似的視網膜色素變性疾病模型，此類方法，也是屬于本發明的保護范圍。進一步地，在本發明的一些實施方案中。北京外包動物模型構建