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廣西小鼠科研技術服務技術

來源: 發布時間:2025-09-11

保存于嚴密緊塞或加蓋的容器里,同時在容器外上標簽,并隨同材料在溶液中投入相應的標簽,以免相互混淆。標簽上注明固定液、材料來源、日期等。標簽上的文字,應用黑色鉛筆或繪圖黑墨水書寫。3.脫水注意事項(1)脫水原理:乙醇與石蠟不相溶,而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蠟。當組織中全部被二甲苯占有時,光線可以透過,組織呈現出不同程度的透明狀態。(2)脫水必須在有蓋的玻璃品中進行,防止吸收空氣中的水分。(3)在更換高一級的脫水劑時,不要移動材料以免損壞,可用吸管吸出器皿中的脫水劑,再用吸水吸盡器皿內剩余液,然后于皿中加入高一級脫水劑。(4)在低濃度酒精中,每級停留不宜太長,否則易使組織變軟,助長材料的解體。(5)在高濃度或純酒精中,每級停留的時間也不宜太長,否則會使組織變脆,影響切片。(6)如需過夜,應停留在70%酒精中。(7)脫水必須徹底,否則不易透明,甚至使透明劑內出現白色混濁現象。4.透明注意事項(1)使用透明劑時,要隨時蓋緊蓋子,以免空氣中的水分進入。(2)更換每級透明劑,動作要迅速,一方面為了不使材料塊干涸,另一方面能避免吸收濕氣。(3)在透明過程中,如果材料周圍出現白色霧狀,說明材料中的水未被脫凈。可以普遍應用于生物醫學研究、藥物篩選、腫、瘤診斷等領域。廣西小鼠科研技術服務技術

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RNA各種可逆的化學修飾被認為是一種新的表觀遺傳調控方式。m6A是真核生物mRNA常見的化學修飾,在調控mRNA穩定性,剪切和翻譯方面具有重要的作用。作者使用轉錄組測序發現了METTL3(甲基轉移酶3),一種主要的RNAN6-腺苷-甲基轉移酶,在人肝細胞(HCC)和多種實體中高表達。在臨床上,METTL3的過度表達與肝細胞患者不良預有關。體外實驗證明敲除METTL3會抑制HCC細胞增殖,遷移及克隆形成。體內實驗證明敲除METTL3會明顯抑制HCC體內成瘤和肺轉移。另外,使用CRISPR/dCas9-VP64系統,內源性高表達METTL3會促進HCC細胞在體外和體內生長。通過轉錄組測序、m6A-Seq、MeRIP-PCR,作者確定了SOCS2(細胞因子信號2的抑制因子)作為METTL3介導的m6A修飾的下游靶基因。敲除METTL3表達會消除SOCS2mRNAm6A修飾并增強SOCS2mRNA表達。m6A介導的SOCS2mRNA降解是依賴于m6A“讀取器”蛋白YTHDF2。總之,METTL3在HCC大部分高表達中,并通過m6A-YTHDF2依賴機制抑制SOCS2表達從而促進HCC進展。因此,作者發現了在肝發生過程中表觀遺傳改變的一種新機制。圖4RNA甲基化轉移酶METLLT3在肝組織中高表達。貴州血液科研技術服務培養動物疾病模型:為人類健康保駕護航。

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外泌體作為藥物載體由于特殊的結構和循環方式,外泌體作為藥物運輸的載體具有獨特的優勢。例如外泌體的尺寸分布能夠增強滲透滯留效應,從而有選擇性地深入組織;其外層磷脂雙分子層可以保護內容物不受各種生物酶的影響,維持各種生物分子的活性;外泌體普遍存在于各種體液和組織中,其體積小,結構、組成與細胞膜類似,導致外泌體可以在避開免疫系統監督的同時深入組織內部,有較好的生物相容性;當采用內源外泌體時,能明顯降低其他藥物載體可能引起的有害免疫反應;除此之外,某些細胞來源或經特殊修飾過的外泌體具有良好的特異性,可以與特定的或組織結合。因此,載藥成為外泌體研究的一個重要分支,具有良好的應用前景。在外泌體中引入藥物的方式包括體內裝載和體外裝載兩種。體內藥物裝載可以通過傳統方法(如病毒轉染、脂質體轉染或電穿孔等)轉染來源細胞,編碼感興趣的RNA或蛋白質,也可以使藥物與來源細胞共混,使細胞分泌產生含有目標生物分子的外泌體。體外藥物裝載則首先需要得到純化的外泌體,然后將感興趣的藥物通過電穿孔或脂質體轉染等方法裝入純化的外泌體。外泌體內可裝載的藥物包括小分子化學藥物、蛋白質和多肽、核酸藥物、天然產物等。

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3)基因/蛋白質表達定性或定量檢測在進行分子檢測的過程中,保持核酸和蛋白質的完整性至關重要,因此在取樣過程中,應盡量避免核酸及蛋白質的降解。如不注意采樣過程,將會導致樣本中的核酸及蛋白質的無差別降解,嚴重影響后續分子檢測結果。在條件允許的情況下,樣本在離體后應立刻裝入凍存管內,并立即放入液氮中進行冷凍。在RNA提取樣本的保存過程中,可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進行RNA酶的。針對蛋白質提取樣本的保存,我們同樣可以使用商品化的蛋白酶劑進行短期處理。聚合酶鏈式反應(PolymeraseChnReaction,PCR)及免印跡(Westernblotting,WB),這兩種實驗手段是分子學檢測中不可或缺的一部分,也是發表至關重要的分子檢測數據。PCR主要用來對基因在基因組層面或轉錄層面的變化進行定性或定量檢測,而WB則主要用來對某一蛋白質的表達進行定量檢測。(4)轉錄組學、蛋白質組學及代謝組學檢測隨著檢測水平及相關產業的不斷發展,各類組學檢測的價格降低,實驗設計中也常常運用組學檢測來提升實驗設計的檔次。在我們進行轉錄組學及蛋白質組學的檢測過程中,同樣是要首先確保目標RNA或蛋白質的片段完整性。培養基有很多不同的名字是因為根據不同細胞的培養和應用場景。廣西疾病模型科研技術服務實驗室

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1.首要原則:細胞不重要情況下立即丟棄,培養箱滅菌,所用培養基也都要丟棄,器械等重新滅菌或拆用新的。2.細菌污染一般都救不回來了,發現的時候培養基一般都很渾濁且細胞都死了3.污染且細胞很重要時:遇到念球菌污染,且細胞為基因改造細胞,非常重要。如231貼壁乳腺細胞,發現細胞周圍出現很小的串珠透亮圓點,非常像念球菌污染,此時細胞狀態尚可,且污染少。處理如下:用預熱或室溫PBS清洗3次,可適當振搖,將污染沖洗下來。隨后加入10-20%雙抗到培養瓶,置于37度培養箱1h,之后再用PBS清洗三遍,直至視野下無可見污染。此時細胞也被沖下大部分,因此此方法只適用在細胞貼壁強,狀態好,密度高時使用。之后每天再更換培養基,每次用PBS沖洗2遍。過幾天細胞狀態尚可時,消化離心時用500r,3min,去掉上清,重復3次。這個方法是根據文獻可利用念球菌和細胞體積重量差異實現分離。基本上這一步做完以后,污染就基本了,接下來就注意多觀察,勤換液就行。廣西小鼠科研技術服務技術

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