熒光壽命成像顯微術是一種利用熒光染料固有特性的成像技術。除了具有特有的發射光譜外，每個熒光分子還有特有的壽命，它反映了熒光基團在發射光子之前處于激發態的時間。除了標準的熒光強度測量外，壽命分析還可以提供其他信息。提高質量，熒光壽命成像提供了額外的信息，有助提高共聚焦成像的質量。 它非常適合用于區分熒光發射光譜重疊的熒光探針，或消除不需要的背景熒光信號。功能成像，FLIM 是一種用于測量和量化成像數據的重要應用。 由于壽命信息與熒光基團濃度無關，因此它非常適合用于功能成像。功能成像超越了傳統的分子樣本位置和濃度記錄，通過該技術可以進一步研究分子功能、相互作用及其環境。熒光壽命成像技術可顯示單指數或多指數熒光衰減。湖南開放式熒光壽命成像哪家好

熒光壽命成像這種技術相對較新，涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。它基于熒光團的熒光壽命取決于其分子環境而并非濃度的事實。它可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環境參數，通過熒光共振能量轉移(FRET)進行的蛋白質相互作用，并可以通過細胞和組織的自發熒光來測量其代謝狀態。分子環境參數可以通過因熒光淬滅或熒光團的構象變化而引起的壽命變化來測量。FLIM可用于多種生物應用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。福建生物熒光壽命成像原理熒光壽命成像不但可在樣品表面，還可在樣品表面以下實現深度解析測量。

影響熒光壽命成像測量的因素：高濃度樣品的影響：1）當激發光照射高濃度樣品時，在激發光入口附近產生熒光，但這些熒光并不能進入熒光檢測器。2）高濃度的分子之間相互作用而發生活性阻礙現象。3）熒光的再吸收：即熒光光譜的短波長端和激發光譜的長波長端如果相互重疊，則發生熒光再吸收。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。散射光的影響： 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法：先用短的激發光激發，檢出溶液的拉曼峰，然后進行熒光光譜校正。因為熒光光譜不隨激發光波長的改變而改變，而拉曼光卻隨之改變。

熒光壽命成像在生命科學研究中的應用：自發熒光FLIM被普遍應用于非標記生物成像領域。所謂自發熒光，即生物細胞本身便包含熒光分子，稱為內源性熒光分子團。FLIM通過對自發熒光分子團（如NAD(P)H）熒光壽命的考察，可以實現細胞代謝的監測。這種方案無需人為對樣品加入熒光試劑便可以發射熒光，有效減少了熒光染料對樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結合及染料對生理性能的干擾影響。外源分子探針FLIM借助于外部熒光染料的注入以產生熒光。如今，為了利用FLIM對物理條件（包括粘度、溫度、酸度和氧化作用）的敏感性，已經開發出了許多適用于體內和體外應用的光學探針。熒光成像在疾病診斷，藥物分布和代謝評估以及血管生物成像中得到了普遍的應用。

熒光壽命的測量和熒光壽命成像主要有時間相關單光子計數法（time correlated single photon counting, TCSPC）、門控探測法（time-gated detection）、條紋相機測量法（streak-FLIM）、頻閃技術等四種常見的方法。TCSPC是目前測量熒光壽命的主要技術，同軸脈沖光源發出的脈沖光引起起始光電倍增管產生電信號，該信號通過恒分信號甄別器1啟動時幅轉換器（time-amplitude converter，TAC），時幅轉換器產生一個隨時間線性增長的電壓信號。此外，同軸脈沖光源發出的脈沖光通過激發單色器后到達樣品池，樣品產生的熒光信號再經過發射單色器到達終止光電倍增管，由此產生的電信號經由恒分信號甄別器2到達時幅轉換器并使其停止工作。影響熒光壽命成像測量的因素：高濃度樣品，高濃度的分子之間相互作用而發生活性阻礙現象。遼寧熒光壽命成像哪家靠譜

熒光壽命成像和生物發光的不同之處：生物發光與熒光壽命成像產生光子的過程和機制是完全不同的。湖南開放式熒光壽命成像哪家好

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