熒光壽命成像這種技術相對較新,涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。它基于熒光團的熒光壽命取決于其分子環境而并非濃度的事實。它可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環境參數,通過熒光共振能量轉移(FRET)進行的蛋白質相互作用,并可以通過細胞和組織的自發熒光來測量其代謝狀態。分子環境參數可以通過因熒光淬滅或熒光團的構象變化而引起的壽命變化來測量。FLIM可用于多種生物應用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。熒光的特性包含有:熒光激發和發射光譜、熒光強度、量子效率、熒光壽命等。佛山化學熒光壽命成像制造
分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間,因此,測量熒光壽命成像需要極快響應時間的探測器。如今主要存在兩類方案:一是時域測量,由一束窄脈沖將熒光分子激發至較高能態S1,接著測量熒光的發射幾率隨時間的變化。典型的時域測量方法有TCSPC和時間門(TG)兩種。TCSPC利用快速秒表測量激發脈沖與探測熒光之間的時間差。使用高重復脈沖激發光激發樣品,在每一個脈沖周期內,較多激發熒光分子發出一個光子,然后記錄光子出現的時刻,并在該時刻記錄一個光子,再下一個脈沖周期內也是相同的情況,經過多次計數可以得到熒光光子隨時間的分布曲線。相似的,TG則探測不同時間窗口內的熒光強度,通過曲線擬合得到熒光壽命。二是頻域測量,對連續激發光進行振幅調制后,分子發出的熒光強度也會受到振幅調制,兩個調制信號之間存在與熒光壽命相關的相位差,因此可以測量該相位差計算熒光壽命。佛山化學熒光壽命成像制造熒光壽命成像通常來講是一定的,不受激發光強度、熒光團濃度等因素的影響。
熒光壽命成像主要應用領域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細胞等有效分離。熒光團在光譜上非常相似(max 580 vs 573)無法分離,但它們在熒光壽命上差異明顯。作為生物傳感器,如評價藥物/理化條件對細胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍,實現可相互驗證的多維度樣品成像。實現真正的生物動力學分析和功能成像。熒光壽命成像的發展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫學檢測有著重要的意義。
熒光壽命取決于熒光分子所處的微環境,通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光分子受激發后發光,熒光壽命量化了發光的衰減率。該特征時間不但取決于特定的熒光團,還取決于其環境,分子相互作用影響弛豫過程并改變熒光團的壽命。熒光壽命是微環境的相對參數,不受環境吸收、樣本濃度等因素影響,因此能夠對生物組織環境中的 p H 值水平、離子濃度、氧分子濃度等微環境狀態進行高精度檢測。熒光壽命顯微成像(FLIM),可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導體領域具有重要的應用價值。熒光壽命成像特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料的原理探究和設計優化。
為什么說熒光壽命成像技術是先進的?熒光壽命成像可以提供熒光強度(光子數)和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發(結合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術,無需解剖或專門制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現深度解析測量。特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復合材料以及其相關的原理探究和設計優化。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環境參數,通過熒光共振能量轉移進行的蛋白質相互作用。浙江單分子熒光壽命成像費用
生物發光與熒光壽命成像不同點:產生光子的原理不同。佛山化學熒光壽命成像制造
熒光壽命成像技術是如何應用在生物醫學中的?隨著近年來對蛋白及分子功能研究的不斷深入,科研工作者除對多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外,對熒光壽命成像的需求也逐漸增加,而熒光壽命成像能提供除熒光強度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息,可用于分子間相互作用(FRET)、分子所處微環境的離子濃度(如Ca2+、pH)及細胞代謝水平的改變等測量,并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發熒光,還可以結合熒光相關光譜對單分子實現熒光壽命相關光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴展了傳統熒光成像的維度,是功能成像的理想工具,在生物醫學領域有廣闊的應用前景。佛山化學熒光壽命成像制造
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