熒光壽命取決于熒光分子所處的微環境,通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光分子受激發后發光,熒光壽命量化了發光的衰減率。該特征時間不但取決于特定的熒光團,還取決于其環境,分子相互作用影響弛豫過程并改變熒光團的壽命。熒光壽命是微環境的相對參數,不受環境吸收、樣本濃度等因素影響,因此能夠對生物組織環境中的 p H 值水平、離子濃度、氧分子濃度等微環境狀態進行高精度檢測。熒光壽命顯微成像(FLIM),可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導體領域具有重要的應用價值。熒光壽命對依賴于熒光團結構的內部因素敏感。湖南單分子熒光壽命成像批發
熒光壽命成像的原理:熒光壽命是熒光團在發射熒光光子返回基態之前保持其激發態的平均時間長度。這取決于熒光團的分子組成和納米環境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結合:對每個圖像像素以測得的熒光壽命進行顏色編碼,產生額外的圖像反差。因此,熒光壽命成像可以提供關于熒光分子空間分布的信息和有關其生化狀態或納米環境的信息。有很多技術可以在顯微鏡環境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體(受體光漂白,FRET AB)或受體(敏化發射,FRET SE)熒光強度的技術。杭州三維熒光壽命成像費用影響熒光壽命成像測量的因素是什么?
熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發光強度和光漂白影響等優點。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導及調控,蛋白間的相互作用等生物研究發揮著很大作用。利用熒光壽命成像顯微鏡技術可實現可以實時監控發光納米顆粒在活細胞內的穩定性。在過去的十年中,光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫學的迅速發展,共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。
熒光壽命成像與傳統的使用熒光強度和光譜信息作為鑒別組織異常的成像方式相比,壽命成像提供了更多的生化診斷信息。熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。另外,采用多光子激發可顯著提高組織體的成像深度,如對人體皮膚自體熒光進行多光子激發熒光壽命成像,成像深度達200 um,組織體的熒光壽命分布揭示了細胞代謝狀態的變化,可用于對皮膚病的診斷。對腔體中瘤的早期臨床診斷,已開發出具有實時及壽命分辨功能的內窺鏡,并對離體膀胱樣品進行測試,得到了黃素分子的自體熒光壽命圖像。熒光壽命成像技術是如何應用在生物醫學中的?
熒光壽命成像的優勢:通過熒光壽命來進行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時間,而且降低了激光對樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進行參數調節。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。熒光壽命是熒光分子在激發態停留的時間,這個時間可以反映熒光分子的內在屬性和所處的微環境,是一個很有用的工具。以往,熒光壽命的測量和計算是件非常復雜和耗時的工作,只有少數專業的科學家關注和使用該工具。傳統的多色成像實驗根據光譜差異來設計,會有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會造成樣品的光損傷。熒光成像在疾病診斷,藥物分布和代謝評估以及血管生物成像中得到了普遍的應用。吉林植物熒光壽命成像操作步驟
熒光壽命成像擴展了傳統熒光成像的維度,是功能成像的理想工具;湖南單分子熒光壽命成像批發
熒光壽命成像技術能夠實時監控納米顆粒在細胞內的穩定性。FLIM不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測生物生物樣品等優點,它在監控熒光納米材料的穩定性上還具有以下幾個優勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細胞分化導致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響;(2)很多常見的發光材料的熒光壽命都遠遠大于細胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾;(3)發光材料的熒光壽命和其材料的穩定性密切相關,熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應材料的化學穩定性。基于上述原理,他們利用FLIM技術系統考察了半導體量子點和金納米簇在活的細胞(HeLa)里72小時內的穩定性,以及不同的表面配體對這一過程的影響。湖南單分子熒光壽命成像批發
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