熒光壽命成像顯微術是一種利用熒光染料固有特性的成像技術。除了具有特有的發射光譜外,每個熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團在發射光子之前處于激發態的時間。除了標準的熒光強度測量外,壽命分析還可以提供其他信息。提高質量,熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質量。 它非常適合用于區分熒光發射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號。功能成像,FLIM 是一種用于測量和量化成像數據的重要應用。 由于壽命信息與熒光基團濃度無關,因此它非常適合用于功能成像。功能成像超越了傳統的分子樣本位置和濃度記錄,通過該技術可以進一步研究分子功能、相互作用及其環境。熒光壽命成像的發展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫學檢測有著重要的意義。杭州植物熒光壽命成像哪個牌子好
熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合,已普遍應用于生物醫學研究和其他領域。FLIM具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發光強度和光漂白影響等優點。在過去的十年中,光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫學的迅速發展,共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。盡管經過幾十年的技術發展,FLIM技術在實際應用中仍然面臨著一些挑戰,例如:FLIM的成像分辨率也會受到光衍射的限制,因此,在實際應用中,我們經常需要在成像速度、圖像質量和微環境壽命精度之間進行權衡。杭州顯微熒光壽命成像哪個牌子好熒光壽命顯微成像技術具有對生物大分子結構、動力學信息和分子環境等進行高分辨高精度測量的能力。
熒光壽命成像技術可以實時監控納米顆粒在細胞內的穩定性,利用熒光壽命成像顯微鏡技術可實現可以實時監控發光納米顆粒在活細胞內的穩定性。熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優點,它在監控熒光納米材料的穩定性上還具有以下幾個優勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細胞分化導致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響;(2)很多常見的發光材料的熒光壽命都遠遠大于細胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾;(3)發光材料的熒光壽命和其材料的穩定性密切相關,熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應材料的化學穩定性。
熒光成像技術涉及精確測量已添加到組織中的自然熒光分子或熒光標簽的熒光衰減率或壽命。由于壽命取決于分子環境的特性,如溫度和pH,以及其與周圍分子的相互作用,因此可利用熒光成像技術獲得有關分子性質及其微環境的信息。通常,使用激光掃描共聚焦顯微鏡進行熒光成像技術,通過掃描激光束穿過熒光樣品以形成圖像,從而實現高分辨率。為了在宏觀尺度上獲得熒光成像的信息,研究人員開發了一種共焦的宏觀系統,該系統結合了激光和非常短的脈沖,利用只有皮秒的長度和非常靈敏的檢測器來檢測熒光。該系統還包括計算光子的電子器件,并繪制它們相對于激光脈沖和樣品上激光束位置的時間分布。熒光壽命(FLT)是熒光團在發射光子并返回基態之前花費在激發態的時間。
熒光壽命成像和熒光光盤有什么區別?與熒光光譜一樣,熒光壽命也是熒光物質的一種內在特有性質,不受熒光物質濃度、激發光強度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強度影響因素影響的條件下,在納米分辨率水平對蛋白互作進行研究,或者通過 FRET 探針研究分子環境變化,更重要的是其測量數據準確性高、易重復。通過熒光壽命成像還可以對樣本所處的微環境進行檢測、對樣品組份進行分離等等。在傳統的熒光強度和熒光光譜兩個維度的基礎上,又增加了熒光壽命這一新的成像維度,大幅度拓展了該系統的應用范圍。熒光壽命成像不需要考慮跳色的影響,從而免去了計算和去除跳色雜質信號的麻煩。杭州三維熒光壽命成像供貨商
熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。杭州植物熒光壽命成像哪個牌子好
熒光壽命成像技術是怎么運作的?通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。可顯示單指數或多指數熒光衰減。數值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測到的光子數)。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,FLIM-FRET為內部參照—這一特點減少了基于強度測量FRET時的很多缺點。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達水平)具有普遍的不變性。使用基于強度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經歷FRET的基本假設。通常情況并非如此。杭州植物熒光壽命成像哪個牌子好
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