熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發光強度和光漂白影響等優點。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導及調控,蛋白間的相互作用等生物研究發揮著很大作用。利用熒光壽命成像顯微鏡技術可實現可以實時監控發光納米顆粒在活細胞內的穩定性。在過去的十年中,光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫學的迅速發展,共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。將熒光壽命成像與共聚焦成像技術結合起來,實現人體三維熒光壽命成像,實現人體三維功能成像奠定基礎。植物熒光壽命成像哪里有賣
熒光壽命成像這種技術相對較新,涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。它基于熒光團的熒光壽命取決于其分子環境而并非濃度的事實。它可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環境參數,通過熒光共振能量轉移(FRET)進行的蛋白質相互作用,并可以通過細胞和組織的自發熒光來測量其代謝狀態。分子環境參數可以通過因熒光淬滅或熒光團的構象變化而引起的壽命變化來測量。FLIM可用于多種生物應用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。湖南化學熒光壽命成像哪里有熒光壽命成像的優勢是什么?
熒光壽命是熒光團在發射熒光光子返回基態之前保持其激發態的平均時間長度。這取決于熒光團的分子組成和納米環境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結合:對每個圖像像素以測得的熒光壽命進行顏色編碼,產生額外的圖像反差。因此,熒光壽命成像可以提供關于熒光分子空間分布的信息和有關其生化狀態或納米環境的信息。有很多技術可以在顯微鏡環境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體(受體光漂白,FRET AB)或受體(敏化發射,FRET SE)熒光強度的技術。
熒光壽命成像是什么?如果分子環境刺激激發態衰變而不發射光子,則熒光強度會降低(淬滅)。熒光淬滅是一條單獨的發射路徑,因此在動力學上與熒光過程形成競爭關系。激發態存儲現在可以通過一個以上的過程衰變,從而縮短熒光壽命。這種壽命的改變可用于收集分子環境的信息。一種特殊類型的淬滅是將激發能量以非輻射的方式傳遞到相鄰的不同熒光染料中:“熒光共振能量轉移”,FRET。此時,不只第1個熒光染料(供體)變暗,壽命變短,而且第二個熒光染料(受體)在“錯誤的”激發顏色下開始發光。由于這種效果的產生需要兩種熒光染料(小于10 nm)的密切接觸,因此將其用作研究分子相互作用的“分子標尺”。它也是許多現代FRET生物傳感器的基礎。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。
熒光壽命成像如何理解?熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(Time-Correlated Single Photon Counting)實現。系統采用超短脈寬激光器作為激發光源,通過光路耦合器,將激光引入顯微光路。激光通過物鏡聚焦照射樣品池,利用光子探測裝置(PMT)對熒光信號進行探測,再用TCSPC計數器對每一個光子進行計數,并將其放入一個對應的時間窗口,經過一定時間的統計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復以后,不同的時間通道累積下來的光子數目不同。以光子數對時間作圖可得到熒光衰減曲線。實現從百ps-ns-us的瞬態測試。綜上所述由于TCSPC系統,一個激光脈沖只采集一個光子信號,所以激光器的重復頻率決定了系統的數據采集速度。重頻越高,采集速度越快,數據信噪比越好。熒光壽命成像的應用領域有哪些?福建分子熒光壽命成像哪家便宜
熒光壽命成像技術是怎么運作的?植物熒光壽命成像哪里有賣
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