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北京單分子熒光壽命成像使用方法

來源: 發布時間:2022-09-10

熒光壽命通常來講是一定的,不受激發光強度、熒光團濃度等因素的影響,只與熒光團所處的微環境有關,因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對樣品進行熒光壽命成像,可以對樣品所在的微環境中的許多物理參數如氧壓、溶液疏水性等及生物化學參數如pH值、離子濃度等進行定量測量。此外,熒光壽命成像技術還可以同時獲得分子狀態和空間分布的信息。因此,熒光壽命成像在生物醫學領域有廣闊的應用前景。熒光壽命成像顯微技術經常用于以下領域:分子影像學、代謝成像、FRET成像、同時進行NAD成像。北京單分子熒光壽命成像使用方法

作為熒光成像中除光譜和強度之外的新維度,當前,熒光壽命成像主要應用領域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細胞等有效分離。熒光壽命成像可以提供熒光強度(光子數)和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術,無需解剖或專門制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現深度解析測量。特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復合材料以及其相關的原理探究和設計優化。杭州紅外熒光壽命成像哪里有熒光壽命成像技術是怎么運作的?

熒光成像技術涉及精確測量已添加到組織中的自然熒光分子或熒光標簽的熒光衰減率或壽命。由于壽命取決于分子環境的特性,如溫度和pH,以及其與周圍分子的相互作用,因此可利用熒光成像技術獲得有關分子性質及其微環境的信息。通常,使用激光掃描共聚焦顯微鏡進行熒光成像技術,通過掃描激光束穿過熒光樣品以形成圖像,從而實現高分辨率。為了在宏觀尺度上獲得熒光成像的信息,研究人員開發了一種共焦的宏觀系統,該系統結合了激光和非常短的脈沖,利用只有皮秒的長度和非常靈敏的檢測器來檢測熒光。該系統還包括計算光子的電子器件,并繪制它們相對于激光脈沖和樣品上激光束位置的時間分布。

熒光壽命是熒光團在發射熒光光子返回基態之前保持其激發態的平均時間長度。這取決于熒光團的分子組成和納米環境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結合:對每個圖像像素以測得的熒光壽命進行顏色編碼,產生額外的圖像反差。因此,熒光壽命成像可以提供關于熒光分子空間分布的信息和有關其生化狀態或納米環境的信息。有很多技術可以在顯微鏡環境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體(受體光漂白,FRET AB)或受體(敏化發射,FRET SE)熒光強度的技術。熒光壽命成像的應用領域有哪些?

熒光壽命成像開始用于組織體的在體成像,與傳統的使用熒光強度和光譜信息作為鑒別組織異常的成像方式相比,壽命成像提供了更多的生化診斷信息。熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。另外,采用多光子激發可顯著提高組織體的成像深度,如對人體皮膚自體熒光進行多光子激發熒光壽命成像,成像深度達200 um,組織體的熒光壽命分布揭示了細胞代謝狀態的變化,可用于對皮膚病的診斷。對腔體中瘤的早期臨床診斷,已開發出具有實時及壽命分辨功能的內窺鏡,并對離體膀胱樣品進行測試,得到了黃素分子的自體熒光壽命圖像。熒光壽命成像技術有兩種:時間域和頻率域。杭州紅外熒光壽命成像哪里有

熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環境參數,通過熒光共振能量轉移進行的蛋白質相互作用。北京單分子熒光壽命成像使用方法

熒光壽命成像或FLIM是基于熒光樣品中不同區域的熒光的指數衰減速率的差異。由τ決定熒光壽命成像的每個像素的強度,這使研究人員可以查看具有不同熒光衰減率的材料之間的對比度,還可以產生顯示其他衰減路徑變化的圖像。可以通過使用脈沖源在時域中確定熒光壽命。當熒光物質被超短脈沖激發時,時間分辨的熒光將呈指數衰減。時間相關單光子計數(tcspc)通常被用作熒光壽命的測量方法,因為它補償了在源強度和單光子的脈沖幅度的變化。更具體地說,TCSPC由單個光子雪崩光電二極管(SPAD)記錄相對于激發激光脈沖的單個光子的壽命。重復記錄多個激光脈沖,并在記錄了足夠多的事件后,研究人員能夠建立所有這些記錄的時間點上事件數量的直方圖。然后,可以將該直方圖擬合到的指數壽命衰減函數的指數函數,并且可以相應地提取壽命參數。北京單分子熒光壽命成像使用方法

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