典型的熒光壽命成像包括從感興趣區(qū)域（ROI）的共焦圖像中提取1-，2-或3-衰減時(shí)間。限制熒光團(tuán)的衰減速率可能是任意的，而且很復(fù)雜，因?yàn)樵诩?xì)胞環(huán)境中存在幾種衰減速率。對(duì)于相量圖，關(guān)于選擇哪種衰減模型以及評(píng)估擬合優(yōu)度的挑戰(zhàn)性決定已成為過去。在相量圖中，所有原始FLIM數(shù)據(jù)在向量空間中均表示為相位和幅度。圖像中的每個(gè)像素都轉(zhuǎn)換為相量圖中的一個(gè)點(diǎn)。單獨(dú)于其在圖像中的位置，具有相似衰減特征的像素在相量圖中形成群集。可以在此陣列中選擇不同的相量簇，并在標(biāo)注中反向注釋對(duì)應(yīng)的像素。熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度（光子數(shù)）和光子壽命的空間分布。杭州顯微熒光壽命成像怎么樣

熒光壽命的測量和熒光壽命成像主要有時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)法（time correlated single photon counting, TCSPC）、門控探測法（time-gated detection）、條紋相機(jī)測量法（streak-FLIM）、頻閃技術(shù)等四種常見的方法。TCSPC是目前測量熒光壽命的主要技術(shù)，同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光引起起始光電倍增管產(chǎn)生電信號(hào)，該信號(hào)通過恒分信號(hào)甄別器1啟動(dòng)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器（time-amplitude converter，TAC），時(shí)幅轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生一個(gè)隨時(shí)間線性增長的電壓信號(hào)。此外，同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光通過激發(fā)單色器后到達(dá)樣品池，樣品產(chǎn)生的熒光信號(hào)再經(jīng)過發(fā)射單色器到達(dá)終止光電倍增管，由此產(chǎn)生的電信號(hào)經(jīng)由恒分信號(hào)甄別器2到達(dá)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器并使其停止工作。杭州顯微熒光壽命成像怎么樣熒光壽命顯微成像技術(shù)具有對(duì)生物大分子結(jié)構(gòu)、動(dòng)力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測量的能力。

熒光分子受激發(fā)后發(fā)光，熒光壽命量化了發(fā)光的衰減率。該特征時(shí)間不但取決于特定的熒光團(tuán)，還取決于其環(huán)境，分子相互作用影響弛豫過程并改變熒光團(tuán)的壽命。熒光壽命是微環(huán)境的相對(duì)參數(shù)，不受環(huán)境吸收、樣本濃度等因素影響，因此能夠?qū)ι锝M織環(huán)境中的 p H 值水平、離子濃度、氧分子濃度等微環(huán)境狀態(tài)進(jìn)行高精度檢測。熒光壽命顯微成像（FLIM），可以定位不同的分子及濃度分布，在生物，材料，半導(dǎo)體領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。熒光壽命成像原理及應(yīng)用說明：熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時(shí)間，處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境，通過對(duì)樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。

熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn)，它在監(jiān)控?zé)晒饧{米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個(gè)優(yōu)勢：（1）熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響，可排除納米材料的胞吐及細(xì)胞分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對(duì)測量的影響；（2）很多常見的發(fā)光材料的熒光壽命都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于細(xì)胞的自熒光的壽命，很易去除生物自熒光對(duì)熒光成像的干擾；（3）發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān)，熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學(xué)穩(wěn)定性。熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù)。熒光壽命成像基于熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實(shí)。

新技術(shù)和新概念的發(fā)展促進(jìn)了數(shù)據(jù)評(píng)估，意味著熒光壽命成像(FLIM)的速度提高了10倍，可以媲美標(biāo)準(zhǔn)共聚焦成像，且操作簡單。熒光過程提供了兩個(gè)用于成像的測量參數(shù)：強(qiáng)度和熒光壽命。熒光壽命是指分子停留在激發(fā)態(tài)的時(shí)間。可以通過觀察足夠大量的激發(fā)-發(fā)射事件集中來測量熒光染料的典型壽命。我們可以測量圖像中所有像素的典型壽命，并將這些數(shù)字記入數(shù)組元素。那就是熒光壽命成像。典型的熒光壽命范圍在0.2到20納秒之間。熒光壽命與熒光染料的濃度無關(guān)。無論樣品結(jié)構(gòu)只有零星熒光染料還是載滿熒光染料：壽命信號(hào)始終相同，并表明在同一環(huán)境中存在相同的熒光染料。因此，熒光壽命不受光漂白的影響。樣品深處的圖像將比表面圖像暗得多——但壽命并沒有改變。這是壽命測定的主要優(yōu)勢。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。浙江開放式熒光壽命成像原理

熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)。杭州顯微熒光壽命成像怎么樣

熒光壽命成像分析是什么？熒光壽命是用于幾種生物測定的穩(wěn)健參數(shù)。它有可能替代傳統(tǒng)的測量技術(shù)，如吸收法、冷光法或熒光強(qiáng)度法。熒光團(tuán)物理化學(xué)環(huán)境的任何變化都會(huì)導(dǎo)致熒光壽命的改變。可通過各種機(jī)制來研發(fā)基于壽命的分析，例如簡單的結(jié)合測定，涉及到兩個(gè)組分的結(jié)合（一個(gè)被熒光標(biāo)記）而引起FLT的變化。另一種機(jī)制是猝滅釋放型測定，涉及大量過量存在的猝滅物質(zhì)，其具有低而有限的熒光。一旦熒光化合物被釋放（通過酶促反應(yīng)或與互補(bǔ)DNA結(jié)合），系統(tǒng)的壽命就會(huì)改變。FLT可與FRET（熒光共振能量轉(zhuǎn)移）分析結(jié)合用于能量轉(zhuǎn)移效率測量。杭州顯微熒光壽命成像怎么樣

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