熒光壽命成像技術(Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy,FLIM)是一種在顯微尺度下展現熒光壽命空間分布的技術,由于其不受樣品濃度影響,具有其他熒光成像技術無法代替的優異性能,目前在生物醫學工程、光電半導體材料等領域是一種重要的表征測量手段。熒光和熒光壽命:分子包含多個單能態S0、S1、S2…和三重態T1…,每個能態都包含多個精細的能級。正常情況下,大部分電子處在*低能態即基態S0 的*低能級上,當分子被光束照射,會吸收光子能量,電子被激發到更高的能態S1 或S2 上,在S2 能態上的電子只能存在很短暫的時間,便會通過內轉換過程躍遷到S1 上,而S1 能態上的電子亦會在極短時間內躍遷到S1 的*低能級上,而這些電子會存在一段時間后通過震蕩弛豫輻射躍遷到基態,這個過程會釋放一個光子,即熒光。此外,亦會有電子躍遷至三重態T1 上,再由T1 躍遷至基態,我們稱之為磷光。熒光壽命成像主要應用領域包括:用于樣品分離。黑龍江植物熒光壽命成像使用步驟
作為熒光成像中除光譜和強度之外的新維度,當前,熒光壽命成像主要應用領域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細胞等有效分離。熒光壽命成像可以提供熒光強度(光子數)和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術,無需解剖或專門制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現深度解析測量。特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復合材料以及其相關的原理探究和設計優化。黑龍江植物熒光壽命成像使用步驟熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術。
熒光壽命成像是一種新型的熒光成像技術,它能夠對不同種類或處于不同狀態的生物組織提供更好的對比度,并反映熒光團及其所處微環境參數的定量分布。熒光壽命成像一般不受諸如激光或熒光強度擾動、熒光染料分布不均勻、染料的光漂白以及其他有礙熒光強度的因素的影響,是熒光光譜分析法的有效補充。超快激光技術,高速、高靈敏度探測技術,以及圖像處理技術的發展,都促進了FLIM 技術的發展.尤其是將熒光壽命成像和共焦顯微技術以及多光子激發熒光顯微技術結合,進一步拓寬了FLIM在生物學領域的應用范圍。
在使用TCSPC測量熒光壽命的過程中,需要調節樣品的熒光強度,確保每次激發后較多只有一個熒光光子到達終止光電倍增管。TCSPC方法的突出優點是靈敏度高、測量結果準確、系統誤差小。采用該技術對樣品進行熒光壽命成像時,必須逐點測量樣品的熒光壽命,而每一點的測量時間又比較長,因此,通常認為該技術不太適合熒光壽命測量。不過,近年來,隨著TCSPC技術和固體超快激光技術的發展,TCSPC技術已具備快速測量熒光壽命的條件。通過與激光共聚焦顯微鏡的結合,可以對樣品進行熒光壽命成像的測量。不同熒光基團激發態停時間不同,大多數生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。
熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發光強度和光漂白影響等優點。在過去的十年中,光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫學的迅速發展,共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導及調控,蛋白間的相互作用等生物研究發揮著很大作用。熒光壽命成像不受染料濃度的影響;湖北三維熒光壽命成像哪里有賣
熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。黑龍江植物熒光壽命成像使用步驟
熒光壽命成像顯微術(FLIM)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術。除了具有特有的發射光譜外,每個熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團在發射光子之前處于激發態的時間。除了標準的熒光強度測量外,壽命分析還可以提供其他信息。過去,壽命成像一直是一種緩慢、復雜的專業化技術。只有經驗豐富的顯微鏡**或物理學家才會使用這種技術。熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質量。它非常適合用于區分熒光發射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號。黑龍江植物熒光壽命成像使用步驟
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