熒光壽命成像可以提供熒光強度(光子數)和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發(結合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術,無需解剖或專門制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現深度解析測量。特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復合材料以及其相關的原理探究和設計優化。熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應的點。因此我們可以獲取每個像素點的壽命信息,也可以獲知每一壽命所對應的圖像區域。不同熒光基團激發態停時間不同,大多數生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。佛山化學熒光壽命成像使用方法
熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。時間域測量方法涉及用短光脈沖照射樣品(比色皿、細胞或組織),然后隨時間測量發射強度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測方法可用于壽命測量,其中時間相關單光子計數(TCSPC)可實現簡單的數據收集和增強的定量光子計數。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調制。在該方法中,發射發生在與入射光相同的頻率處,并且隨著激發光兼有相位延遲和振幅的變化(解調)。壽命測量不需要波長比率探針來提供眾多分析物的定量測定。壽命法通過使用光譜位移探針擴展了分析物濃度范圍的靈敏度。壽命測量可用于沒有直接探針的分析物。包括葡萄糖、抗原或基于熒光能量轉移轉導機制的任何親和力或免疫測定。佛山化學熒光壽命成像使用方法熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環境參數。
熒光壽命成像FLIM相比于熒光強度成像更有優勢。通過熒光強度成像可以獲得熒光分子的空間分布,較為直接和簡便,但是當熒光分子具有相似的頻譜特性,或是同樣的熒光分子在不同環境下時,依賴強度進行成像的方案便無法準確反映信息。與基于光強的成像方式不同,熒光壽命成像FLIM適用于測量熒光分子環境的變化,或是測量分子的運動情況。其結果與熒光分子濃度無關,且不受影響光強的光散射或是光吸收影響,可以精確測量熒光淬滅過程,對生物分子微環境進行定量測量。
熒光壽命成像和生物發光的異同點是什么?生物發光與熒光壽命成像不同點:產生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發光水母一樣,生物發光與熒光成像在本質上,都是機體中特定的細胞或材料發出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發光與熒光壽命成像產生光子的過程和機制是完全不同的。生物發光與熒光成像相同點:都需要對細胞進行標記。生物發光產生的光子和熒光壽命成像產生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發光水母一樣。除此之外,生物發光和熒光壽命成像都需要對目標細胞進行標記,讓細胞產生熒光素酶或者熒光蛋白。熒光壽命成像有潛力應用于瘤識別,病變診斷等領域。
熒光壽命成像技術及其在生物醫學中的應用:熒光分子的壽命就像熒光分子的激發光譜和發射光譜一樣是熒光分子的固有特性,隨著近年來對蛋白及分子功能研究的不斷深入,科研工作者除對多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外,對熒光壽命成像的需求也逐漸增加,而熒光壽命成像能提供除熒光強度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息,可用于分子間相互作用(FRET)、分子所處微環境的離子濃度(如Ca2+、pH)及細胞代謝水平的改變等測量,并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發熒光,還可以結合熒光相關光譜對單分子實現熒光壽命相關光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴展了傳統熒光成像的維度,是功能成像的理想工具,在生物醫學領域有廣闊的應用前景。影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?珠海分子熒光壽命成像哪里有
熒光壽命成像可以體現熒光物質形貌信息。佛山化學熒光壽命成像使用方法
熒光壽命成像中的熒光壽命及其含義:假定一個無限窄的脈沖光(δ函數)激發n0個熒光分子到其激發態,處于激發態的分子將通過輻射或非輻射躍遷返回基態。假定兩種衰減躍遷速率分別為Γ和knr,則激發態衰減速率可表示為:其中n(t)表示時間t時激發態分子的數目,由此可得到激發態物種的單指數衰減方程。熒光壽命定義為衰減總速率的倒數:熒光強度正比于衰減的激發態分子數,因此可將上式改寫為:其中I0是時間為零時的熒光強度,τ為熒光壽命。也就是說熒光強度衰減到初始強度的1/e時所需要的時間就是該熒光物種在測定條件下的熒光壽命。實際上用熒光強度的對數對時間作圖,直線斜率即為熒光壽命倒數的負值。熒光壽命也可以理解為熒光物種在激發態的統計平均停留時間。事實上當熒光物質被激發后有些激發態分子立即返回基態,有的甚至可以延遲到5倍于熒光壽命時才返回基態,這樣就形成了實驗測定的熒光強度衰減曲線。佛山化學熒光壽命成像使用方法
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