熒光分析和成像技術因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應用于生物物理、生物化學、醫學、物理、化學等領域,利用熒光光譜技術和熒光顯微技術可以分析樣品中熒光團的組分和分布。不過,由于熒光分析技術大多是基于熒光強度的測量,容易受到激發光強度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來講是一定的,不受激發光強度、熒光團濃度等因素的影響,只只與熒光團所處的微環境有關,因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對樣品進行熒光壽命成像,可以對樣品所在的微環境中的許多物理參數如氧壓、溶液疏水性等及生物化學參數如pH值、離子濃度等進行定量測量。此外,熒光壽命成像技術還可以同時獲得分子狀態和空間分布的信息。熒光壽命成像在生物醫學領域有廣闊的應用前景。浙江分子熒光壽命成像批發
熒光壽命成像(FLIM)的方法特別適合于體內診斷,因為它們是無創且無損的。因此,它們被普遍用于受試者的臨床研究和醫學檢查。例如,該技術可以用于以下領域:皮膚的體內診斷:人類皮膚的多光子擴散層析成像結合了雙光子激發和非解掃檢測,因此,多光子FLIM可以提供組織層的光學切片圖像,深度可達100 μm。人皮膚細胞的體內雙光子成像是可能的,而不會損害組織的活力,可以從亞細胞分辨率重建三維結構。眼科檢查:眼科FLIM結合了快速光束掃描和皮秒二極管激光器激發的功能。該方法非常靈敏,可以記錄人眼眼底(背景)的壽命圖像。通過這種方式,有可能及早發現眼部疾病,因為這些疾病通常伴隨著眼底的代謝變化。反過來,這些引起內源性熒光團的熒光衰減參數的變化。上海顯微熒光壽命成像好不好熒光壽命檢測經典方法為點對點的時間相關單光子計數(TCSPC)。
熒光壽命成像 (FLIM)通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。可顯示單指數或多指數熒光衰減。數值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測到的光子數)。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,FLIM-FRET為內部參照—這一特點減少了基于強度測量FRET時的很多缺點。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達水平)具有普遍的不變性。使用基于強度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經歷FRET的基本假設。通常情況并非如此。供體分子這種變化的“非結合”組分給測量的FRET效率帶來了相當大的不確定性,使得無法在實驗之間進行比較。熒光壽命成像克服了這一缺點。
熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發光強度和光漂白影響等優點。在過去的十年中,光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫學的迅速發展,共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導及調控,蛋白間的相互作用等生物研究發揮著很大作用。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進行參數調節。
與熒光光譜一樣,熒光壽命也是熒光物質的一種內在特有性質,不受熒光物質濃度、激發光強度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強度影響因素影響的條件下,在納米分辨率水平對蛋白互作進行研究,或者通過 FRET 探針研究分子環境變化,更重要的是其測量數據準確性高、易重復。通過熒光壽命成像還可以對樣本所處的微環境進行檢測、對樣品組份進行分離等等。在傳統的熒光強度和熒光光譜兩個維度的基礎上,又增加了熒光壽命這一新的成像維度,大幅度拓展了該系統的應用范圍。由于熒光壽命成像不受樣品濃度影響,具有其他熒光成像技術無法代替的優異性能。天津動物熒光壽命成像供應
熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環境參數。浙江分子熒光壽命成像批發
熒光壽命成像技術實時監控納米顆粒在細胞內的穩定性:利用熒光壽命成像顯微鏡技術可實現可以實時監控發光納米顆粒在活細胞內的穩定性。熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優點,它在監控熒光納米材料的穩定性上還具有以下幾個優勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細胞分化導致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響;(2)很多常見的發光材料的熒光壽命都遠遠大于細胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾;(3)發光材料的熒光壽命和其材料的穩定性密切相關,熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應材料的化學穩定性。浙江分子熒光壽命成像批發
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