熒光壽命成像技術有兩種:時間域和頻率域。(1)時域FLIM:需要脈沖光源,所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM(熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM),理由一是激光是脈沖的,二是買雙光子的老師一般也搭配一個FLIM。(2)頻域FLIM:需要一個相位調制的光源,有用LED調制的。熒光壽命成像FLIM的應用:1)細胞體自身熒光壽命分析;2)自身熒光相對熒光標記的有效區(qū)分;3)具有相同頻譜性質的不同熒光標記的區(qū)分;4)活細胞內水介質的PH值測量;5)局部氧氣濃度測量;6)活細胞內鈣濃度測量;7)時間分辨Forster共振能量轉移(FRET):納米級尺度上的遠程測量,環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?重慶三維熒光壽命成像一般多少錢
熒光壽命成像技術(Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy,F(xiàn)LIM)是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術,由于其不受樣品濃度影響,具有其他熒光成像技術無法代替的優(yōu)異性能,目前在生物醫(yī)學工程、光電半導體材料等領域是一種重要的表征測量手段。熒光和熒光壽命:分子包含多個單能態(tài)S0、S1、S2…和三重態(tài)T1…,每個能態(tài)都包含多個精細的能級。正常情況下,大部分電子處在*低能態(tài)即基態(tài)S0 的*低能級上,當分子被光束照射,會吸收光子能量,電子被激發(fā)到更高的能態(tài)S1 或S2 上,在S2 能態(tài)上的電子只能存在很短暫的時間,便會通過內轉換過程躍遷到S1 上,而S1 能態(tài)上的電子亦會在極短時間內躍遷到S1 的*低能級上,而這些電子會存在一段時間后通過震蕩弛豫輻射躍遷到基態(tài),這個過程會釋放一個光子,即熒光。此外,亦會有電子躍遷至三重態(tài)T1 上,再由T1 躍遷至基態(tài),我們稱之為磷光。天津生物熒光壽命成像價格表不同熒光基團激發(fā)態(tài)停時間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。
影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?散射光的影響: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法:先用短的激發(fā)光激發(fā),檢出溶液的拉曼峰,然后進行熒光光譜校正。因為熒光光譜不隨激發(fā)光波長的改變而改變,而拉曼光卻隨之改變。高濃度樣品的影響:1)當激發(fā)光照射高濃度樣品時,在激發(fā)光入口附近產生熒光,但這些熒光并不能進入熒光檢測器。2)高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3)熒光的再吸收:即熒光光譜的短波長端和激發(fā)光譜的長波長端如果相互重疊,則發(fā)生熒光再吸收。
新技術和新概念的發(fā)展促進了數(shù)據(jù)評估,意味著熒光壽命成像(FLIM)的速度提高了10倍,可以媲美標準共聚焦成像,且操作簡單。熒光過程提供了兩個用于成像的測量參數(shù):強度和熒光壽命。熒光壽命是指分子停留在激發(fā)態(tài)的時間。可以通過觀察足夠大量的激發(fā)-發(fā)射事件集中來測量熒光染料的典型壽命。我們可以測量圖像中所有像素的典型壽命,并將這些數(shù)字記入數(shù)組元素。那就是熒光壽命成像。典型的熒光壽命范圍在0.2到20納秒之間。熒光壽命與熒光染料的濃度無關。無論樣品結構只有零星熒光染料還是載滿熒光染料:壽命信號始終相同,并表明在同一環(huán)境中存在相同的熒光染料。因此,熒光壽命不受光漂白的影響。樣品深處的圖像將比表面圖像暗得多——但壽命并沒有改變。這是壽命測定的主要優(yōu)勢。熒光壽命顯微成像是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合。
熒光壽命成像在生物醫(yī)學研究和臨床診斷應用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求,如在FRET測量中,要求能同時測量供體和受體的熒光強度隨時間的衰減,多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段.目前,基于門控像增強器的多光譜寬場FLIM 技術一次只能獲得至多兩個譜段的熒光壽命圖像,而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低,這些都限制了其應用范圍.目前的一個研究方向是,發(fā)展光譜分辨率高、成像速度快、價格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術。在種類繁多的顯微技術中,熒光壽命顯微成像技術被普遍地應用于生物學研究及臨床診斷等領域。重慶三維熒光壽命成像一般多少錢
熒光壽命成像系統(tǒng)是一種用于化學領域的分析儀器。重慶三維熒光壽命成像一般多少錢
在種類繁多的顯微技術中,熒光壽命顯微成像技術(FLIM)具有對生物大分子結構、動力學信息和分子環(huán)境等進行高分辨高精度測量的能力,因此其重要性日漸提升,被普遍地應用于生物學研究及臨床診斷等領域。熒光的特性包含有:熒光激發(fā)和發(fā)射光譜、熒光強度、量子效率、熒光壽命等,其中,熒光壽命是指熒光分子在激發(fā)態(tài)上存在的平均時間(納秒量級)。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間,因此,測量熒光壽命需要極快響應時間的探測器。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫(yī)學檢測有著重要的意義。重慶三維熒光壽命成像一般多少錢
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