熒光分子受激發后發光,熒光壽命量化了發光的衰減率。該特征時間不但取決于特定的熒光團,還取決于其環境,分子相互作用影響弛豫過程并改變熒光團的壽命。熒光壽命是微環境的相對參數,不受環境吸收、樣本濃度等因素影響,因此能夠對生物組織環境中的 p H 值水平、離子濃度、氧分子濃度等微環境狀態進行高精度檢測。熒光壽命顯微成像(FLIM),可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導體領域具有重要的應用價值。熒光壽命成像原理及應用說明:熒光壽命是指分子受到光脈沖激發后返回基態之前在激發平均停留的時間,處于激發態的熒光分子在從激發到基態的過程中發射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環境,通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命成像可以體現熒光物質形貌信息。珠海動物熒光壽命成像怎么用
熒光壽命成像可以提供熒光強度(光子數)和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發(結合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術,無需解剖或專門制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現深度解析測量。特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復合材料以及其相關的原理探究和設計優化。熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應的點。因此我們可以獲取每個像素點的壽命信息,也可以獲知每一壽命所對應的圖像區域。江蘇多色熒光壽命成像研發熒光壽命顯微成像,可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導體領域具有重要的應用價值。
新技術和新概念的發展促進了數據評估,意味著熒光壽命成像(FLIM)的速度提高了10倍,可以媲美標準共聚焦成像,且操作簡單。熒光過程提供了兩個用于成像的測量參數:強度和熒光壽命。熒光壽命是指分子停留在激發態的時間??梢酝ㄟ^觀察足夠大量的激發-發射事件集中來測量熒光染料的典型壽命。我們可以測量圖像中所有像素的典型壽命,并將這些數字記入數組元素。那就是熒光壽命成像。典型的熒光壽命范圍在0.2到20納秒之間。熒光壽命與熒光染料的濃度無關。無論樣品結構只有零星熒光染料還是載滿熒光染料:壽命信號始終相同,并表明在同一環境中存在相同的熒光染料。因此,熒光壽命不受光漂白的影響。樣品深處的圖像將比表面圖像暗得多——但壽命并沒有改變。這是壽命測定的主要優勢。
熒光壽命成像是什么?如果分子環境刺激激發態衰變而不發射光子,則熒光強度會降低(淬滅)。熒光淬滅是一條單獨的發射路徑,因此在動力學上與熒光過程形成競爭關系。激發態存儲現在可以通過一個以上的過程衰變,從而縮短熒光壽命。這種壽命的改變可用于收集分子環境的信息。一種特殊類型的淬滅是將激發能量以非輻射的方式傳遞到相鄰的不同熒光染料中:“熒光共振能量轉移”,FRET。此時,不只第1個熒光染料(供體)變暗,壽命變短,而且第二個熒光染料(受體)在“錯誤的”激發顏色下開始發光。由于這種效果的產生需要兩種熒光染料(小于10 nm)的密切接觸,因此將其用作研究分子相互作用的“分子標尺”。它也是許多現代FRET生物傳感器的基礎。熒光壽命顯微成像是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合。
市場上熒光壽命的測量方式可分為時域法和頻域法,兩者在本質上是相通的,測量精度相近,頻域技術是時域法的傅里葉變換的延伸。時域和頻域技術在各種顯微壽命成像平臺中都有應用,時間相關單光子計數方法(TCSPC )是常見的時域技術,而新興的數字頻域技術(FastFLIM? )則取代了傳統的模擬頻域技術,憑借其獨恃的優勢成為應用廣的頻域技術。熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(Time-Correlated Single Photon Counting)實現。由于TCSPC系統,一個激光脈沖只采集一個光子信號,所以激光器的重復頻率決定了系統的數據采集速度。重頻越高,采集速度越快,數據信噪比越好。熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。杭州單分子熒光壽命成像訂購
利用熒光壽命成像顯微鏡技術可實現可以實時監控發光納米顆粒在活細胞內的穩定性。珠海動物熒光壽命成像怎么用
熒光壽命成像在生物醫學研究和臨床診斷應用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求,如在FRET測量中,要求能同時測量供體和受體的熒光強度隨時間的衰減,多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段.目前,基于門控像增強器的多光譜寬場FLIM 技術一次只能獲得至多兩個譜段的熒光壽命圖像,而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低,這些都限制了其應用范圍.目前的一個研究方向是,發展光譜分辨率高、成像速度快、價格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術。珠海動物熒光壽命成像怎么用
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