在基于時間相關單光子計數的熒光壽命成像實驗中，通過選用超快激光器可以優化脈沖持續時間，單光子探測器和時間數字轉換器的時間抖動則成為制約時間分辨率的關鍵參數。熒光壽命成像可進行高質量的多色成像實驗或實現STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應用的熒光壽命測定技術。熒光壽命通常在ps～us量級，在如此短的時間量級上進行測量，它是較為成熟準確的測試手段。TCSPC的工作原理是使用一個同步信號源驅動激光器，出射光脈沖照射樣品池，在利用光子探測裝置（多為PMT）對熒光信號進行探測，每一個光子計數信號在FT1010中都會落入一個對應的時間窗口，經過一定時間的統計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復以后，不同的時間通道累積下來的光子數目不同。熒光壽命成像主要通過TCSPC技術實現。廣東熒光壽命成像操作步驟

熒光壽命成像技術有兩種：時間域和頻率域。（1）時域FLIM：需要脈沖光源，所以一般在雙光子的系統上比較常見FLIM（熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM），理由一是激光是脈沖的，二是買雙光子的老師一般也搭配一個FLIM。（2）頻域FLIM：需要一個相位調制的光源，有用LED調制的。熒光壽命成像FLIM的應用：1）細胞體自身熒光壽命分析；2）自身熒光相對熒光標記的有效區分；3）具有相同頻譜性質的不同熒光標記的區分；4）活細胞內水介質的PH值測量；5）局部氧氣濃度測量；6）活細胞內鈣濃度測量；7）時間分辨Forster共振能量轉移（FRET）：納米級尺度上的遠程測量，環境敏感的FRET探針定量測量。江門開放式熒光壽命成像怎么操作熒光壽命成像通常用于研究生物分子間相互作用、細胞中的信號事件或區分光譜重疊的熒光團。

熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。時間域測量方法涉及用短光脈沖照射樣品（比色皿、細胞或組織），然后隨時間測量發射強度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測方法可用于壽命測量，其中時間相關單光子計數（TCSPC）可實現簡單的數據收集和增強的定量光子計數。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調制。在該方法中，發射發生在與入射光相同的頻率處，并且隨著激發光兼有相位延遲和振幅的變化（解調）。壽命測量不需要波長比率探針來提供眾多分析物的定量測定。壽命法通過使用光譜位移探針擴展了分析物濃度范圍的靈敏度。壽命測量可用于沒有直接探針的分析物。包括葡萄糖、抗原或基于熒光能量轉移轉導機制的任何親和力或免疫測定。

在種類繁多的顯微技術中，熒光壽命顯微成像技術（FLIM）具有對生物大分子結構、動力學信息和分子環境等進行高分辨高精度測量的能力，因此其重要性日漸提升，被普遍地應用于生物學研究及臨床診斷等領域。熒光的特性包含有：熒光激發和發射光譜、熒光強度、量子效率、熒光壽命等,其中，熒光壽命是指熒光分子在激發態上存在的平均時間（納秒量級）。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間，因此，測量熒光壽命需要極快響應時間的探測器。熒光壽命成像的發展很好地彌補了基于強度成像的問題，對生物醫學檢測有著重要的意義。熒光壽命成像的發展很好地彌補了基于強度成像的問題，對生物醫學檢測有著重要的意義。

熒光壽命是熒光基團在通過發射熒光光子返回基態之前在其激發態下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發態停時間不同，大多數生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經典方法為點對點的時間相關單光子計數（TCSPC），但由于過去檢測硬件的局限和復雜的使用而沒有被普遍地應用于科學研究。隨著技術的發展，在顯微鏡視野內進行超快速全像素熒光壽命信號采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。該圖形視圖使任何觀察者都能快速區分和分離FLIM圖像中的不同壽命種群。相量FLIM分布的解釋很簡單。因為每個物種都有特定的相量，所以可以在單個像素內解析多個分子物種。相量圖如何生成？當使用時間分辨單光子計數（TCSPC）系統獲取數據時，相量FLIM分布是從傅立葉變換中得出的（Digman等，2008）。圖像中的每個像素對應于相量圖中的一個點。熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。江門開放式熒光壽命成像怎么操作

熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術。廣東熒光壽命成像操作步驟

時域法熒光壽命的測量和熒光壽命成像主要有時間相關單光子計數法（time correlated single photon counting, TCSPC）、門控探測法（time-gated detection）、條紋相機測量法（streak-FLIM）、頻閃技術等四種常見的方法。TCSPC是目前測量熒光壽命的主要技術，同軸脈沖光源發出的脈沖光引起起始光電倍增管產生電信號，該信號通過恒分信號甄別器1啟動時幅轉換器（time-amplitude converter，TAC），時幅轉換器產生一個隨時間線性增長的電壓信號。此外，同軸脈沖光源發出的脈沖光通過激發單色器后到達樣品池，樣品產生的熒光信號再經過發射單色器到達終止光電倍增管，由此產生的電信號經由恒分信號甄別器2到達時幅轉換器并使其停止工作。此時，時幅轉換器根據累積電壓輸出一個數字信號并在多通道分析儀（multi-channel analyzer）的相應時間通道計入一個信號，表明檢測到壽命為該時間的一個光子。經過幾十萬次的重復后，不同的時間通道累積下來的光子數目不相同。廣東熒光壽命成像操作步驟

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