熒光壽命是熒光分子在激發(fā)態(tài)停留的時間，這個時間可以反映熒光分子的內(nèi)在屬性和所處的微環(huán)境，是一個很有用的工具。以往，熒光壽命的測量和計算是件非常復(fù)雜和耗時的工作，只有少數(shù)專業(yè)的科學(xué)家關(guān)注和使用該工具。傳統(tǒng)的多色成像實驗根據(jù)光譜差異來設(shè)計，會有串色等限制，而且需要多次采集圖像，會造成樣品的光損傷。通過熒光壽命來進(jìn)行成像，只需要拍攝一次就完成圖像采集，不但減少了成像時間，而且降低了激光對樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單，方便快捷，不需要進(jìn)行參數(shù)調(diào)節(jié)。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點對點的時間相關(guān)單光子計數(shù)（TCSPC）。上海分子熒光壽命成像哪家靠譜

熒光顯微技術(shù)具有無損、非接觸、高特異性、高靈敏、高體友好以及能夠提供功能信息等突出優(yōu)點，一直是生命科學(xué)，尤其是細(xì)胞生物學(xué)研究的重要工具。近年來，隨著生命科學(xué)的發(fā)展，對熒光顯微技術(shù)也提出了越來越高的要求，激光技術(shù)、熒光探針標(biāo)記技術(shù)、新型熒光探測技術(shù)和成像手段的不斷發(fā)展，極大地促進(jìn)了熒光顯微技術(shù)的發(fā)展，成為推動生命科學(xué)發(fā)展的重要動力。此外，熒光顯微技術(shù)也在成像的對比機(jī)制方面獲得了很大的進(jìn)展。超分辨(SR)成像技術(shù)的發(fā)展，也為熒光壽命成像(FLIM)的新發(fā)展提供了巨大的機(jī)遇。杭州熒光壽命成像一般多少錢熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。

熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn)：在數(shù)據(jù)處理上，由于曲線擬合迭代過程的需求，計算成本較其他成像方案更高。在成像原理上，熒光壽命受多種外界因素影響，這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等，很難對這些參數(shù)控制變量，使得測量熒光壽命存在交叉干擾問題。此外，與普通光學(xué)顯微技術(shù)類似，介質(zhì)光散射影響成像信噪比及空間分辨率，成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展，這也使得熒光壽命成像FLIM在對細(xì)胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測發(fā)揮出不可替代的作用。結(jié)合多種先進(jìn)成像系統(tǒng)，如雙光子成像、結(jié)構(gòu)光照明等，可進(jìn)一步提升熒光壽命成像FLIM的分辨率和測量精度。另一方面，提升熒光壽命解調(diào)的算法性能，將壓縮感知、深度學(xué)習(xí)等熱點算法與FLIM結(jié)合，也同樣對FLIM的發(fā)展起著至關(guān)重要的作用。總的來說，熒光壽命成像FLIM的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。

熒光壽命成像FLIM在生物學(xué)上的應(yīng)用根據(jù)熒光分子種類可以分為三種：分別為自發(fā)熒光FLIM、外源分子探針FLIM和FRET-FLIM。自發(fā)熒光FLIM被普遍應(yīng)用于非標(biāo)記生物成像領(lǐng)域。所謂自發(fā)熒光，即生物細(xì)胞本身便包含熒光分子，稱為內(nèi)源性熒光分子團(tuán)。FLIM通過對自發(fā)熒光分子團(tuán)（如NAD(P)H和FAD）熒光壽命的考察，可以實現(xiàn)細(xì)胞代謝的監(jiān)測。這種方案無需人為對樣品加入熒光試劑便可以發(fā)射熒光，有效減少了熒光染料對樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結(jié)合及染料對生理性能的干擾影響。熒光壽命是用于幾種生物測定的穩(wěn)健參數(shù)。

熒光壽命成像技術(shù)有兩種：時間域和頻率域。（1）時域FLIM：需要脈沖光源，所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM（熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM），理由一是激光是脈沖的，二是買雙光子的老師一般也搭配一個FLIM。（2）頻域FLIM：需要一個相位調(diào)制的光源，有用LED調(diào)制的。熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用：1）細(xì)胞體自身熒光壽命分析；2）自身熒光相對熒光標(biāo)記的有效區(qū)分；3）具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標(biāo)記的區(qū)分；4）活細(xì)胞內(nèi)水介質(zhì)的PH值測量；5）局部氧氣濃度測量；6）活細(xì)胞內(nèi)鈣濃度測量；7）時間分辨Forster共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）：納米級尺度上的遠(yuǎn)程測量，環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。熒光壽命成像（FLIM）對細(xì)胞信號傳導(dǎo)及調(diào)控，蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。上海分子熒光壽命成像哪家靠譜

熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。上海分子熒光壽命成像哪家靠譜

在基于時間相關(guān)單光子計數(shù)的熒光壽命成像實驗中，通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時間，單光子探測器和時間數(shù)字轉(zhuǎn)換器的時間抖動則成為制約時間分辨率的關(guān)鍵參數(shù)。熒光壽命成像可進(jìn)行高質(zhì)量的多色成像實驗或?qū)崿F(xiàn)STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應(yīng)用的熒光壽命測定技術(shù)。熒光壽命通常在ps～us量級，在如此短的時間量級上進(jìn)行測量，它是較為成熟準(zhǔn)確的測試手段。TCSPC的工作原理是使用一個同步信號源驅(qū)動激光器，出射光脈沖照射樣品池，在利用光子探測裝置（多為PMT）對熒光信號進(jìn)行探測，每一個光子計數(shù)信號在FT1010中都會落入一個對應(yīng)的時間窗口，經(jīng)過一定時間的統(tǒng)計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復(fù)以后，不同的時間通道累積下來的光子數(shù)目不同。上海分子熒光壽命成像哪家靠譜

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