熒光壽命成像顯微術(FLIM)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術。除了具有特有的發射光譜外，每個熒光分子還有特有的壽命，它反映了熒光基團在發射光子之前處于激發態的時間。除了標準的熒光強度測量外，壽命分析還可以提供其他信息。過去，壽命成像一直是一種緩慢、復雜的專業化技術。只有經驗豐富的顯微鏡**或物理學家才會使用這種技術。熒光壽命成像提供了額外的信息，有助提高共聚焦成像的質量。它非常適合用于區分熒光發射光譜重疊的熒光探針，或消除不需要的背景熒光信號。熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優點；天津動物熒光壽命成像原理
熒光壽命成像分析：熒光壽命是用于幾種生物測定的穩健參數。它有可能替代傳統的測量技術，如吸收法、冷光法或熒光強度法3。熒光團物理化學環境的任何變化都會導致熒光壽命的改變。可通過各種機制來研發基于壽命的分析，例如簡單的結合測定，涉及到兩個組分的結合（一個被熒光標記）而引起FLT的變化。另一種機制是猝滅釋放型測定，涉及大量過量存在的猝滅物質，其具有低而有限的熒光。一旦熒光化合物被釋放（通過酶促反應或與互補DNA結合），系統的壽命就會改變。FLT可與FRET（熒光共振能量轉移）分析結合用于能量轉移效率測量。福建單分子熒光壽命成像哪家專業熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。
影響熒光壽命成像測量的幾種因素：1．溫度影響：一般說來，熒光隨溫度升高而強度減弱，溫度升高1℃，熒光強度下降1～10%不等。測定時，溫度必須保持恒定。 2．PH值影響：PH 值影響物質的熒光，應選擇較佳PH制備樣品。 3．光分解對熒光測定的影響： 熒光物質吸收紫外可見光后，發生光化學反應，導致熒光強度下降。因此，熒光分析要采用高靈敏度的檢測器，而不是用增強光源來提高靈敏度。測定時，用較窄的激發光部分的狹縫，以減弱激發光。同時，用較寬的發射狹縫引導熒光。熒光分析應盡量在暗環境中進行。
熒光壽命成像FLIM在生物學上的應用根據熒光分子種類可以分為三種：分別為自發熒光FLIM、外源分子探針FLIM和FRET-FLIM。自發熒光FLIM被普遍應用于非標記生物成像領域。所謂自發熒光，即生物細胞本身便包含熒光分子，稱為內源性熒光分子團。FLIM通過對自發熒光分子團（如NAD(P)H和FAD）熒光壽命的考察，可以實現細胞代謝的監測。這種方案無需人為對樣品加入熒光試劑便可以發射熒光，有效減少了熒光染料對樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結合及染料對生理性能的干擾影響。熒光壽命成像基于熒光團的熒光壽命取決于其分子環境而并非濃度的事實。
熒光壽命成像有幾點優勢：1.不需要考慮跳色的影響，從而免去了計算和去除跳色雜質信號的麻煩；去除跳色雜質的準確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設計和控制、以及跳色信號估算的算法，這些因素使得通過穩態光強度測量熒光壽命成像的精確度在很多時候受到質疑。2.穩態光強度的熒光壽命成像測量很容易受熒光標記光漂白或是激發光散射背景的影響,而這些因素對FLIM-FRET的測量影響相對較低。3.熒光壽命成像可以定量的區分參與FRET和沒有參與FRET的分子數量，這樣深入的定量分析是穩態光強度方法做不到的。熒光壽命成像在生物醫學領域有廣闊的應用前景。天津動物熒光壽命成像原理
熒光壽命成像可以體現熒光物質形貌信息。天津動物熒光壽命成像原理
時域法熒光壽命的測量和熒光壽命成像主要有時間相關單光子計數法（time correlated single photon counting, TCSPC）、門控探測法（time-gated detection）、條紋相機測量法（streak-FLIM）、頻閃技術等四種常見的方法。TCSPC是目前測量熒光壽命的主要技術，同軸脈沖光源發出的脈沖光引起起始光電倍增管產生電信號，該信號通過恒分信號甄別器1啟動時幅轉換器（time-amplitude converter，TAC），時幅轉換器產生一個隨時間線性增長的電壓信號。此外，同軸脈沖光源發出的脈沖光通過激發單色器后到達樣品池，樣品產生的熒光信號再經過發射單色器到達終止光電倍增管，由此產生的電信號經由恒分信號甄別器2到達時幅轉換器并使其停止工作。此時，時幅轉換器根據累積電壓輸出一個數字信號并在多通道分析儀（multi-channel analyzer）的相應時間通道計入一個信號，表明檢測到壽命為該時間的一個光子。經過幾十萬次的重復后，不同的時間通道累積下來的光子數目不相同。天津動物熒光壽命成像原理
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