抗原與抗體的制備

抗體的制備

單克隆抗體和多克隆抗體：單克隆抗體(McAb)用雜交瘤技術(shù)制備(詳見第三章)，其特點(diǎn)：特異性好，親和力高，只識(shí)別一個(gè)表位。多克隆抗體(polyclonal antibodies)存在于免疫動(dòng)物的血清中，可通過直接分離血清獲得，主要應(yīng)用于免疫學(xué)診斷。也可經(jīng)中性鹽析和層析法進(jìn)一步提出單一類別的免疫球蛋白(多為IgG)，使診斷及各種研究在更精確的水平上進(jìn)行。優(yōu)點(diǎn)：可識(shí)別多個(gè)表位，缺點(diǎn)：特異性差，易出現(xiàn)交叉反應(yīng)，親和力低，通過其他抗原的吸收可獲得針對(duì)單個(gè)抗原決定簇的單價(jià)因子血清。嵌合抗體和噬菌體抗體等基因工程抗體制備詳見第三章。 含光微納的微流控產(chǎn)品的耐用性，能夠長時(shí)間穩(wěn)定運(yùn)行，降低客戶的維護(hù)成本。浙江分子診斷微流控產(chǎn)品哪家好

分子診斷技術(shù)是指以DNA和RNA為診斷材料，用分子生物學(xué)技術(shù)通過檢測基因的存在、缺陷或表達(dá)異常，從而對(duì)人體狀態(tài)和疾病作出診斷的技術(shù)。其基本原理是檢測DNA或RNA的結(jié)構(gòu)是否變化、量的多少及表達(dá)功能是否異常，以確定受檢者有無基因水平的異常變化，對(duì)疾病的預(yù)防、預(yù)測、診斷、zhi liao和預(yù)后具有重要意義。1．核酸分子雜交技術(shù)應(yīng)用該技術(shù)可對(duì)特定DNA或RNA序列進(jìn)行定性或定量檢測，包括Southern印跡雜交、Northern印跡雜交、點(diǎn)雜交、原位雜交等。2．聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)是一種模擬體內(nèi)DNA半保留復(fù)制過程，在體外酶促合成特異性DNA的片段的方法。生化診斷微流控產(chǎn)品前景我們的微流控產(chǎn)品設(shè)計(jì)獨(dú)特，能夠靈活適應(yīng)不同實(shí)驗(yàn)需求，提供個(gè)性化的解決方案。

抗原抗體反應(yīng)的主要影響因素

(一)抗原和抗體濃度、比例抗原和抗體濃度、比例對(duì)抗原抗體反應(yīng)影響比較大，是決定性因素，如前所述。

(二)電解質(zhì)抗原與抗體特異性結(jié)合后，其親水性減弱，分子表面所帶的電荷易受電解質(zhì)影響而失去，復(fù)合物間的排斥力下降，導(dǎo)致第一階段已形成的可溶性結(jié)合物能進(jìn)一步聯(lián)結(jié)，出現(xiàn)明顯的凝集或沉淀現(xiàn)象。試驗(yàn)中常用0.85%的NaCl溶液作為稀釋液，以提供適當(dāng)濃度的電解質(zhì)。

(三)溫度適當(dāng)?shù)臏囟瓤稍黾涌乖c抗體分子碰撞的機(jī)會(huì)，加速結(jié)合物體積的增大，一般而言溫度越高，形成可見反應(yīng)的速度越快，但過高則會(huì)使抗原或抗體變性失活，影響試驗(yàn)結(jié)果。一般在37℃下進(jìn)行試驗(yàn)，但也有些抗原抗體在4℃下進(jìn)行反應(yīng)較好。

(四)酸堿度pH過高或過低都將直接影響抗原或抗體的理化性質(zhì)。例如，當(dāng)pH降至3.0左右時(shí)，因接近細(xì)菌抗原的等電點(diǎn)，細(xì)菌表面蛋白或其他基團(tuán)所帶的電荷消失，其相互間的排斥力喪失而導(dǎo)致非特異性酸凝集，影響試驗(yàn)的可靠性。

分子診斷主要技術(shù)發(fā)展的時(shí)間軸早期的分子診斷設(shè)備，多為大型集成化設(shè)備，包含很多的操作模塊。在原理上，早期的設(shè)備并無很多創(chuàng)新，主要是將多種手工操作內(nèi)容自動(dòng)化和集成化，發(fā)展到基因芯片，才有了原理性的突破。1990年提出的人類基因組計(jì)劃、后來的蛋白組學(xué)以及從近期開始的微生物組計(jì)劃，極大的推動(dòng)了分子診斷設(shè)備的發(fā)展。產(chǎn)品方面，較早期時(shí)有Affymetrix公司推出的di yi塊商業(yè)化基因芯片。接下來是PCR儀器的發(fā)展。早期的PCR儀器，是簡單的DNA解鏈、復(fù)制、復(fù)性等過程，除了水浴鍋?zhàn)詣?dòng)化，并沒有太多技術(shù)含量。數(shù)字PCR技術(shù)出現(xiàn)后，與生物信息學(xué)和微型加工技術(shù)關(guān)聯(lián)起來，發(fā)展速度很快。再后來出現(xiàn)了微流控技術(shù)和基因測序技術(shù)。基因測序技術(shù)經(jīng)歷了一代、二代、三代，目前測序技術(shù)，仍然是重要的發(fā)展方向。含光微納的微流控產(chǎn)品具有良好的兼容性，能夠與其他設(shè)備和實(shí)驗(yàn)平臺(tái)無縫集成。

多聚酶鏈反應(yīng)：多聚酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)又稱體外核酸擴(kuò)增技術(shù)，即對(duì)特定DNA的片段進(jìn)行非細(xì)胞依賴性擴(kuò)增，其基本過程是將已提取的待測DNA在一對(duì)寡核苷酸引物、三磷酸核苷及耐熱DNA多聚酶存在的情況下，分別于90℃、55℃和72℃下經(jīng)變性、退火和核苷酸鏈的延伸，如此循環(huán)數(shù)十次以擴(kuò)增DNA。擴(kuò)增物經(jīng)溴乙錠染色后作凝膠電泳，再于紫外燈下觀察特定堿基對(duì)數(shù)的DNA的片段，以出現(xiàn)橙紅色的電泳帶為陽性。若需進(jìn)一步鑒定，可將凝膠分離的DNA回收再用特異性探針進(jìn)行雜交分析。PCR在免疫學(xué)中通常應(yīng)用于ai基因、凋亡相關(guān)基因的表達(dá)、HLA的定型與基因分析、免疫球蛋白和T細(xì)胞受體多樣性研究以及細(xì)胞因子、粘附分子的檢測。PCR的方法有30余種，如多重PCR、巢式PCR、二次PCR、共享引物PCR、逆轉(zhuǎn)錄PCR、錨定PCR等等。現(xiàn)臨床研究蕞常用的是逆轉(zhuǎn)錄PCR，現(xiàn)簡介如下：首先提取細(xì)胞總RNA，然后在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以mRNA為模板合成cDNA，隨后加入特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，再經(jīng)瓊脂糖電泳檢測特異性的DNA，從而反映出某種基因的轉(zhuǎn)錄狀況。我們不斷進(jìn)行研發(fā)和創(chuàng)新，為客戶提供更多樣化、更高級(jí)別的微流控產(chǎn)品。黑龍江驅(qū)動(dòng)方式微流控產(chǎn)品技術(shù)

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轉(zhuǎn)基因技術(shù)：轉(zhuǎn)基因技術(shù)是近年來生物技術(shù)中的一項(xiàng)重大突破。其建立使得動(dòng)物可不必通過有性雜交即能獲得新的基因。其基本原理是通過顯微注射或逆轉(zhuǎn)錄病毒，將外源性基因?qū)氩溉閯?dòng)物的受精卵或其早期胚胎，并經(jīng)分子雜交分析胚胎或其后代組織中是否有外源性基因存在及其在體內(nèi)的表達(dá)情況。目前通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立的轉(zhuǎn)基因鼠，已應(yīng)用于研究多種免疫分子的基因表達(dá)、自身反應(yīng)性T細(xì)胞的負(fù)選擇作用及自身耐受機(jī)制、MHC的表達(dá)與糖尿病的關(guān)系等。此外也可將分離的目的基因與載體(質(zhì)粒或噬菌體)通過粘性末端結(jié)合后，轉(zhuǎn)移至原核或真核細(xì)胞，使其整合到宿主細(xì)胞DNA上，藉以生產(chǎn)重組細(xì)胞因子等，為進(jìn)一步研究免疫分子的結(jié)構(gòu)與功能及臨床疾病的診斷提供理想的制劑。浙江分子診斷微流控產(chǎn)品哪家好