對于Co-IP實驗初學者，常遇到的“坑”主要有：首先，抗體選擇至關重要。選擇特異性不強或親和力低的抗體，可能導致非特異性結合，干擾實驗結果。因此，選擇經過驗證的高質量抗體是關鍵。其次，實驗操作規范不容忽視。細胞裂解不充分、洗滌不當等都會影響蛋白復合物的純化，進而影響實驗結果。初學者應嚴格按照步驟操作，確保每一步都精確無誤。再者，結果解讀需謹慎。初學者可能因經驗不足，誤將非特異性結合視為真實相互作用。因此，解讀結果時，需結合其他實驗方法如Western Blot進行驗證。另外，實驗安全不可忽視。遵守實驗室規章制度，注意個人防護和實驗室衛生，是確保實驗順利進行的基礎。綜上所述，初學者在進行Co-IP實驗時，應關注抗體選擇、實驗操作、結果解讀和實驗安全等方面，通過不斷學習和實踐，逐漸積累經驗，避免常見錯誤。IP-Mass（免疫沉淀-質譜）技術應用場景。新疆免疫共沉淀檢測CoIP-MS
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）實驗是一種生物化學和分子生物學技術，用于檢測和鑒定在細胞內發生蛋白質-蛋白質相互作用的復合物。該實驗依賴于抗原-抗體特異性結合的原理，通過特定抗體來捕獲并富集與目標蛋白質相互作用的蛋白質復合物。在免疫共沉淀實驗中，首先需要將細胞或組織在適當的裂解條件下破碎，釋放出其中的蛋白質。這些蛋白質中，許多會通過非共價鍵（如氫鍵、疏水作用、離子鍵等）或共價鍵（在某些情況下）相互作用形成復合物。然后，向裂解物中加入針對目標蛋白質的特異性抗體，這些抗體會與目標蛋白質結合形成抗原-抗體復合物。接下來，利用與抗體結合的親和劑（如ProteinA、ProteinG或特定種類的瓊脂糖珠），通過免疫親和反應將抗原-抗體復合物捕獲并固定在固相支持物上。在經過一系列洗滌步驟后，可以去除與固相支持物非特異性結合的蛋白質，從而將目標蛋白質及其相互作用的蛋白質復合物富集在固相支持物上。通過適當的洗脫方法將富集的蛋白質復合物從固相支持物上洗脫下來，并進行后續的分析。山西互作機制CoIPCo-IP技術雖廣泛應用，但受抗體特異性、低豐度蛋白、樣品制備和瞬時互作等限制，需結合其他方法驗證！
Co-IP（免疫共沉淀）技術的基本原理是基于抗原與抗體之間的特異性結合，從而實現對蛋白質相互作用的研究。在Co-IP實驗中，研究人員使用特異性抗體與目標蛋白結合，形成抗原-抗體復合物。這個復合物隨后被吸附到固化了蛋白A或G的支持物上，由于這些蛋白具有吸附抗體的能力，因此相應的抗原分子及其相互作用蛋白質也被一同吸附。這個過程稱為沉淀。接下來，未被沉淀的蛋白質通過緩沖液的流洗被去除，確保只有與目標蛋白特異性結合的蛋白質被保留下來。這些被沉淀的蛋白質復合物隨后被洗脫下來，并通過特定的檢測方法進行分析，從而證實蛋白質之間的相互作用。Co-IP技術為深入研究蛋白質相互作用提供了有力工具，有助于揭示蛋白質的功能和調控機制。
Co-IP（免疫共沉淀）和ChIP（染色質免疫沉淀）是兩種常用于研究蛋白質與DNA或蛋白質與蛋白質相互作用的實驗方法。實驗原理方面的區別：Co-IP利用抗體與抗原之間的特異性結合，將目標蛋白及其與之相互作用的蛋白一起拉下來，進而研究它們之間的相互作用。而ChIP則是在活細胞狀態下固定蛋白質-DNA復合物，并通過超聲或酶處理將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段，然后通過抗原抗體的特異性識別反應沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段。CoIP是研究蛋白質與蛋白互作的實驗技術。
Co-IP的優點主要體現在以下幾個方面：高特異性：通過使用特異性抗體，Co-IP能夠精確地捕獲目標蛋白及其相互作用伙伴，減少非特異性干擾。靈敏度高：該方法能夠檢測到低豐度的蛋白質相互作用，適用于研究微弱或瞬時的蛋白互作。適用于多種樣本類型：無論是細胞裂解液、組織提取物還是純化后的蛋白質復合物，Co-IP都能進行有效分析。與質譜技術兼容：Co-IP與質譜分析相結合，可以鑒定互作蛋白的身份，提供更為詳盡的互作網絡信息。操作相對簡便：Co-IP的實驗流程相對清晰，操作簡便，適用于大多數實驗室的研究需求。免疫共沉淀是研究蛋白質相互作用的方法，可用于確定候選或未知蛋白的相互作用，并可通過WB或質譜檢測。廣東相互作用蛋白檢測CoIP聯合質譜檢測
Co-IP和ChIP實驗對象有什么區別。新疆免疫共沉淀檢測CoIP-MS
CoIP-Mass和CoIP-WB檢測要點：
試驗設計：盡量進行試驗組別設計和進行生物學重復檢測，提高后續驗證的陽性率。常規過表達單組（AbIPvsIgGIP）；動態互作組學（實驗組vs對照組vsIg組）。根據目的設計適當的生物學重復。如果后續以CoIP-Mass數據進行互作組標準分析，則需要3-4組生物學重復；如果后續以尋找關鍵互作蛋白，進行機制深入研究，則建議1-2次生物學重復。經驗顯示單次重復假陽性率90%。
蛋白表達和細胞量：細胞用量要求大(2-10e7細胞量），建議不少于5e7（金標準：320g離心細胞量50μl，保障項目用量）。低表達蛋白，建議使用過表達組進行檢測。蛋白表達可根據WB結果或初步根據數據庫判定（ProteomicsDB；HumanProteinAtlas）。 新疆免疫共沉淀檢測CoIP-MS