Co-IP（免疫共沉淀）和ChIP（染色質免疫沉淀）是兩種常用于研究蛋白質與DNA或蛋白質與蛋白質相互作用的實驗方法。實驗原理方面的區別：Co-IP利用抗體與抗原之間的特異性結合，將目標蛋白及其與之相互作用的蛋白一起拉下來，進而研究它們之間的相互作用。而ChIP則是在活細胞狀態下固定蛋白質-DNA復合物，并通過超聲或酶處理將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段，然后通過抗原抗體的特異性識別反應沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段。CoIP實驗技術重復和生物重復設計建議。山西免疫沉淀CoIP-MS
免疫共沉淀實驗的注意事項主要包括以下幾點：樣品的準備：樣品的準備是非常關鍵的步驟。要保證細胞處于適當的生長狀態下，避免細胞過度生長或死亡。同時，要確保細胞表達所需的蛋白質，可以通過轉染等方法引入外源基因。抗體的選擇：抗體的選擇對于免疫共沉淀實驗至關重要。要確保使用的抗體特異性高，能夠識別目標蛋白質，并且與其它蛋白質的交叉反應小。此外，抗體的來源和親和性也需要考慮，以確保實驗結果的可靠性和重復性。細胞裂解條件：細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內存在的所有蛋白質-蛋白質相互作用。同時，裂解液中要加入各種酶抑制劑，以防止蛋白質降解。共沉淀的驗證：在免疫共沉淀實驗中，需要確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白。此外，要驗證抗體的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀。另外，需要確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中，而不是由于細胞的溶解才發生的，這需要進行蛋白質的定位來確定。實驗的重復性：由于免疫共沉淀實驗的靈敏度和特異性可能受到多種因素的影響，因此建議進行多次重復實驗，以驗證結果的可靠性。重慶互作蛋白檢測CoIP mass spectrometry檢測免疫共沉淀法證實蛋白互作，基于抗體專一性，揭示生理性相互作用。
Co-IP技術作為研究蛋白質相互作用的重要手段，其結果在多數情況下是可靠的。然而，該技術也存在一些潛在的限制和影響因素，需要研究人員予以注意。在實際應用中，由于細胞內蛋白質種類繁多且相互作用復雜，可能會出現非特異性結合或背景噪聲，這要求研究者選擇特異性強的抗體，并通過洗滌步驟去除雜質。此外，樣品的純度、抗體的質量和實驗條件等也會對結果產生影響，因此，對抗體的選擇和驗證、樣品的準備以及實驗條件的控制都至關重要。為了進一步提高結果的準確性，研究人員通常會結合多種方法進行相互驗證，如使用不同抗體或實驗條件重復實驗，或結合質譜技術來驗證Co-IP的結果。這些措施共同增強了Co-IP技術結果的可靠性。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一種經典的用于研究蛋白質相互作用的方法，它基于抗體和抗原之間的專一性作用。該技術主要用于確定兩種蛋白質在完整細胞內的生理性相互作用。基本原理：當細胞在非變性條件下被裂解時，細胞內蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留下來。通過利用預先固化在agarose beads上的蛋白質A的抗體來免疫沉淀A蛋白，與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。隨后，通過蛋白變性分離，可以對B蛋白進行檢測，從而證明兩者之間的相互作用。Co-IP實驗要點：溫和裂解、驗證抗體、充分結合、沉降分離、洗脫純化，確保結果準確可靠！
Co-IP實驗的內源檢測注意事項如下：首先，確保使用的抗體具有高特異性和親和力，這是內源檢測成功的關鍵。由于細胞內蛋白表達復雜，非特異性結合可能導致實驗結果失真。其次，嚴格控制實驗條件，如細胞裂解和洗滌條件，以避免破壞蛋白質相互作用或引入非特異性蛋白。溫和地釋放細胞內蛋白，保證釋放出的蛋白不被蛋白酶分解，同時實驗過程需保持低溫。此外，注意樣本的采集和處理。樣本應盡快處理，避免蛋白降解，同時防止樣本在運輸過程中溫度過高導致變質。另外，結合其他實驗方法進行驗證，如Western Blot等，以確認Co-IP實驗結果的可靠性。綜上所述，Co-IP實驗的內源檢測需要關注抗體選擇、實驗條件控制、樣本處理以及結果驗證等方面，以確保實驗結果的準確性和可靠性。Co-IP技術利用抗原抗體結合，研究蛋白質互作，揭示其功能機制的有力工具！北京CoIP mass
Co-IP技術簡便、特異、靈敏，是探索蛋白質相互作用和疾病機制的重要工具！山西免疫沉淀CoIP-MS
Co-IP實驗的外源檢測是一種通過引入外源表達的蛋白來驗證蛋白質間相互作用的方法。與外源檢測相對的是內源檢測，即檢測細胞內自然狀態下蛋白質間的相互作用。在外源檢測中，研究者通常會在細胞中轉染含有特定基因的質粒，使該基因在細胞內過量表達，從而產生大量的外源蛋白。然后，利用特異性抗體對這些外源蛋白進行免疫共沉淀（Co-IP），并通過Western Blot等技術檢測與其相互作用的蛋白是否也被沉淀下來。這種方法有助于驗證蛋白質間的相互作用，并確定相互作用的具體條件或影響因素。同時，由于外源蛋白的表達量較高，因此外源檢測通常比內源檢測更為敏感，更容易檢測到較弱的相互作用。然而，需要注意的是，外源檢測的結果可能受到多種因素的影響，如外源蛋白的表達水平、轉染效率、細胞狀態等。因此，在進行外源檢測時，需要嚴格控制實驗條件，確保實驗結果的準確性和可靠性。同時，為了更好地了解蛋白質間的相互作用，通常需要結合內源檢測和外源檢測的結果進行綜合分析。山西免疫沉淀CoIP-MS