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青海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

來源: 發布時間:2024-11-12

對Genovis的ImpaRATOR處理的樣品的分析表明,ImpaRATOR很好地消化了所有三種底物并產生了相似的糖肽,但預期的聚糖種類不同。用ImpaRATOR處理的樣品比其他樣品含有更多的變異,因為每種肽都檢測到多種聚糖結構。觀察到的聚糖種類主要是單唾液酸化和二唾液酸化he心1結構,這與依那西普的預期一致。用ImpaRATOR或OpeRATOR消化的SialEXO預處理樣品均產生具有裸核1結構的肽,但攜帶在ImpaRATOR消化樣品中觀察到的Tn抗原的肽T205-P207除外。依那西普用 SialEXO 和 GalactEXO 預處理,然后用 ImpaRATOR 消化,得到含有 Tn 抗原的肽。總之,這些數據證明了ImpaRATOR的高聚糖底物接受度。ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。例如,OpeRATOR在兩個O-糖基化氨基酸之間消化的效率比ImpaRATOR更有效。具有完整唾液酸或Tn抗原的依那西普被OpeRATOR消化得非常弱(數據未顯示)。用于糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的水解,而不會用酶污染z終制劑。青海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

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GlycOCATCH設計用于特異性結合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。親和樹脂基于無活性的Genovis的OpeRATOR酶,該酶經過工程設計,可以高親和力結合O-糖基化蛋白和肽。 結合在pH 5-8的生理緩沖液中進行。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強相互作用,可以用8M尿素進行洗脫。或者,可以使用活性OpeRATOR酶進行洗脫,該酶消化O-聚糖位點的N末端結合的O-糖蛋白。在后一種情況下,肽在天然條件下回收。OpeRATOR 凍干酶包含在購買中。由于 O-糖蛋白上的旋亞氨酸化 O-聚糖與樹脂結合效率更高,因此唾液酸酶混合物 SialEXO 凍干也包含在購買中。天津瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶用于水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上的α1-2、α1-3和α1-4-連接巖藻糖殘基。

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從依那西普水解β1-3和β1-4半乳糖:Genovis的GalactEXO Immobilized 對 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖均具有酶活性,這些半乳糖存在于裝飾有 N- 和 O-連接糖基化的生物制藥中,例如 Fc-融合蛋白依那西普。將依那西普與GalactEXO固定化孵育60分鐘,并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亞基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分別分析。與GalactEXO Immobilized孵育導致N-連接和O-連接聚糖上的半乳糖殘基水解,這在半乳糖基化物種中被視為信號丟失。對游離的N-聚糖分析證實了LC-MS數據。

FucosEXO中的酶在大腸桿菌中表達,帶有His標簽,分子量為87 kDa和64 kDa。FucosEXO在天然條件下水解糖蛋白上的巖藻糖,在6至8的pH值范圍內顯示出高活性,無需輔助因子或添加劑。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4.即用型 - 只需加水即可。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于在 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上有效水解 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖。人血清中 O-糖蛋白的富集:GlycOCATCH還可用于從復雜的樣品混合物(如人血清)中選擇性富集O-糖基化蛋白。簡而言之,用Genovis的SialEXO處理血清并應用于GlycOCATCH樹脂。洗滌樹脂,用8M尿素洗脫O-糖基化蛋白。用胰蛋白酶消化樣品并使用 RP-LC-MS/MS 進行分析,并使用 Swiss Prot 數據庫鑒定蛋白質列表。O-糖基化蛋白以黃色表示。OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗體;

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上海倍篤生物科技有限公司(簡稱“倍篤生物”),由中國科學院及生物醫藥產業界人士,于2018年1月共同創立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材(如Genovis的IdeS酶),遵守相關法規要求,如cGMP規范、ISO13485質量管理體系認證等,致力于為診斷領域如分子診斷及病原微生物檢測研發等,藥物研發領域如細胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細胞及外泌體研究等客戶提供合規、高質量物料及專業服務,以期與客戶共同協作,加快研發及生產進度,為客戶提供更多價值。PNGase F Automation 含有以自動化友好的 96 孔板形式凍干的 PNGase F 酶。天津瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶

復雜樣品的特異性凈化;改進 MS 分析的樣品制備。青海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成,均帶有His標簽,組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 單位小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率; 3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!將混合物加載到GlycOCATCH上,洗滌樹脂,并用8M尿素洗脫結合的肽。純化后,在RP-LC-MS上分離樣品。數據顯示,糖苷酸肽的選擇性純化,攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集:IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區域。胰蛋白酶消化IgA后,將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上,并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預期的 O-糖基化鉸鏈肽富集,具有不同程度的糖基化。青海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

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