廣東生物制品支原體檢測培養法

來源：發布時間：2025-11-10

支原體 NAT 檢測的樣本結果需結合 FAM 信號與 VIC 信號的表現綜合判定，同時警惕抑制現象對結果的影響。若 FAM 信號 2 復孔有 1 孔以上 Ct<40 且呈有效 “S” 型擴增，VIC 信號 2 復孔 Ct<40 且呈有效 “S” 型擴增，判定為陽性；若 VIC 信號 2 復孔 Ct≥40 或無明顯擴增曲線，則為陽性但存在抑制。若 FAM 信號 2 復孔 Ct≥40 或無明顯擴增曲線，VIC 信號 2 復孔 Ct<40 且呈有效 “S” 型擴增，判定為陰性；若 VIC 信號同樣 Ct≥40 或無明顯擴增曲線，則陰陽性無法判斷且存在抑制。出現抑制現象需重測，重測仍有抑制時，陽性傾向樣本可適當稀釋，陰性傾向樣本需優化提取條件。

CAR-T 產品支原體檢測需在放行前快速完成，湖州申科快速版試劑盒 2.5 小時可出結果。廣東生物制品支原體檢測培養法

可比性驗證是支原體檢測 NAT 方法替代傳統檢測方法的關鍵依據，法規明確要求需將 NAT 法與藥典規定的傳統方法進行檢測限（LOD）對比。若以 NAT 法替代培養法，需證實其檢測限≤10CFU/mL；替代指示細胞培養法時，每種被測支原體的檢測限需≤100CFU/mL。對比實驗需采用相同樣本同步開展 NAT 檢測與傳統方法檢測，通過 CFU 可比性分析，確保兩種方法的檢測結果具有一致性。這一要求既保障了新方法的檢測效能不低于傳統標準，又為生物制品企業切換檢測方法提供了合規依據，兼顧了效率提升與質量安全。

上海疫苗產品支原體檢測技術服務培養基、血清等原輔料入庫前需做支原體檢測，排除外源污染風險。

支原體 NAT 檢測中異常曲線的出現多與操作設置、耗材使用或實驗環境相關，需針對性排查解決。首先需確認軟件設置正確性，對照試劑盒說明書檢查時間、溫度、循環數、熒光采集等參數，尤其需注意關閉不含 ROX 試劑的參比熒光功能。其次若擴增曲線無抬升卻出現 CT 值，需調整基線范圍，將起點設為熒光信號穩定的循環數，終點設為擴增曲線起峰前一個循環數。再者需確保耗材與儀器匹配，避免使用普通 PCR 耗材或與加熱模塊規格不符的反應管，防止熒光傳導不佳或熱傳導不充分。此外，曲線先上升后下降可能是反應液蒸發導致，上機前需檢查八連管管蓋無縫隙，避免液面下降干擾結果。

此前，支原體檢測依賴培養法和指示細胞培養法，這兩種傳統方法均被各國藥典列為基礎檢測手段，但存在明顯短板。培養法作為 “金標準”，需陽性活菌參照，每批次培養基需做靈敏度測試，完整合規檢測周期長達 21-35 天；指示細胞培養法同樣耗時 14-28 天，難以滿足新型生物制品快速上市、短貨架期的放行需求。更棘手的是，面對高蛋白等復雜樣品基質，傳統方法易受干擾或抑制，需額外增加傳代培養步驟，導致檢測時間再延長 2-3 周，嚴重影響生產效率，也難以適配新型生物制品的檢測場景。

支原體檢測過程中，每批次培養基需做靈敏度測試，確保檢測有效。

檢測限驗證是支原體 NAT 方法（核酸擴增法）合規性的關鍵要求，法規明確界定需為每種目標支原體確定陽性檢測臨界值。驗證流程需滿足嚴格的實驗設計：每種支原體至少進行三次單獨的 10 倍梯度稀釋，每次稀釋后需制備平行管檢測，再確保各稀釋濃度獲得 24 個檢測結果。陽性臨界值的判定標準為，該濃度下至少 95% 的試驗運行能得到陽性結果，即 24 個樣品中需至少出現 23 個有效陽性結果。這一嚴謹設計旨在確保 NAT 檢測方法在實際應用中，能夠穩定檢出低濃度支原體污染，避免因檢測靈敏度不足導致的安全風險，為生物制品質量控制提供可靠保障。

EP 新規明確支原體驗證菌株 GC/CFU 比值＜10，需在指數階段收獲以保障活性與分散性。北京免疫細胞產品支原體檢測方法學驗證

支原體檢測過程中，需嚴格遵循 “先陰后陽” 操作原則，避免交叉污染。廣東生物制品支原體檢測培養法

湖州申科的支原體檢測方案已在多個領域積累了豐富的客戶申報案例，覆蓋細胞療法、抗體藥物、疫苗、CRO/CDMO 等細分賽道。在細胞療法領域，方案成功應用于已上市藥物的方法變更，替換進口試劑盒并通過中檢院復核，驗證結果獲得 CDE 認可用于產品放行檢測在抗體藥物領域，支持多家企業完成 BLA 申報；在疫苗與 CRO/CDMO 領域，為諸多頭部企業提供 IND 申報支持。方案的應用場景涵蓋從 IND 到 BLA/NDA 的全申報周期，適配自動化提取 + 檢測試劑盒 + 菌株 + qPCR 儀、外源因子一體機等多種配置，滿足不同企業的個性化檢測需求，獲得市場認可。

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