傳統(tǒng)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（BET）只能檢測(cè)革蘭氏陰性菌的 LPS，無(wú)法識(shí)別革蘭氏陽(yáng)性菌 LTA、真菌酵母多糖、病毒鞭毛蛋白等非內(nèi)毒素?zé)嵩?，存在漏檢風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)，部分樣品（如脂質(zhì)體、表面活性劑制劑）會(huì)因內(nèi)毒素吸附導(dǎo)致低內(nèi)毒素回收（LER），BET法難以準(zhǔn)確定量。MAT 法通過(guò)單核細(xì)胞表面的多種 TLR 受體（TLR1-TLR10），可識(shí)別不同類型熱原：TLR4 識(shí)別 LPS、TLR2/TLR6 識(shí)別 LTA 與酵母多糖、TLR5 識(shí)別鞭毛蛋白、TLR3 識(shí)別病毒 dsRNA 等，實(shí)現(xiàn) “全熱原覆蓋”。湖州申科生物熱原檢測(cè)試劑盒（MAT法）的驗(yàn)證數(shù)據(jù)顯示，其對(duì)不同濃度非內(nèi)毒素?zé)嵩许憫?yīng)：如 0.1-100μg/mL 鞭毛蛋白可檢測(cè)到 0.005-0.035EU/mL熱原活性，0.1-10μg/mL LTA 對(duì)應(yīng) 0.1-0.7EU/mL 熱原活性，1-100μg/mL 雷西莫特（TLR7/8 配體）對(duì)應(yīng) 0.5-3.0EU/mL 熱原活性。此外，MAT法檢測(cè)的是熱原的生物活性（而非單純 LPS 含量），可避免 LER 導(dǎo)致的假陰性，為CGT等高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品提供更有保障的熱原檢測(cè)方案。

MAT 試劑盒熱原檢測(cè)配套細(xì)胞的質(zhì)量控制，是保障檢測(cè)結(jié)果可靠的重要環(huán)節(jié)，需從功能、安全性、穩(wěn)定性三方面建立體系。在功能鑒定上，按歐洲 MAT 法要求，需檢測(cè)細(xì)胞的 Toll 樣受體（TLR1-TLR9）表達(dá)情況—確保細(xì)胞能響應(yīng)不同類型熱原（如 TLR4 響應(yīng) LPS、TLR2/6 響應(yīng)脂磷壁酸）；同時(shí)考察細(xì)胞倍增時(shí)間（確?；钚苑€(wěn)定）、熱原反應(yīng)性（對(duì)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素和非內(nèi)毒素?zé)嵩男盘?hào)強(qiáng)度），確保細(xì)胞具備熱原識(shí)別與炎癥因子分泌能力。在安全性檢測(cè)上，需驗(yàn)證細(xì)胞無(wú)菌（無(wú)細(xì)菌、真菌污染）、無(wú)支原體、無(wú)外源病毒因子（如 HIV、HBV）及分枝桿菌，避免外源污染影響檢測(cè)結(jié)果。在穩(wěn)定性考察上，需監(jiān)測(cè)不同代次細(xì)胞的熱原刺激敏感性，一般要求細(xì)胞使用代次不超過(guò) 20 代，代次過(guò)高會(huì)導(dǎo)致 TLR 表達(dá)下降、炎癥因子分泌減少，影響檢測(cè)靈敏度。湖州申科的配套細(xì)胞還額外通過(guò) Western blot 驗(yàn)證 TLR 受體表達(dá)量，并用不同非內(nèi)毒素?zé)嵩潴w刺激驗(yàn)證響應(yīng)性，形成全維度質(zhì)量控制，確保細(xì)胞適配熱原檢測(cè)需求。

單核細(xì)胞系培養(yǎng)的高度可控性，為熱原檢測(cè)結(jié)果的可靠性提供關(guān)鍵保障。其培養(yǎng)基配方（如營(yíng)養(yǎng)成分、血清濃度）可定制，確保細(xì)胞獲取充足營(yíng)養(yǎng)；培養(yǎng)環(huán)境（37℃、5% CO?、濕度≥90%）可恒定控制，維持細(xì)胞好的活性與 TLR 受體表達(dá)水平，避免因環(huán)境波動(dòng)導(dǎo)致細(xì)胞功能異常。這種可控性還能防止細(xì)胞遺傳突變與外源污染（如支原體、病毒），確保不同批次單核細(xì)胞系的熱原響應(yīng)一致性，讓熱原檢測(cè)結(jié)果批間差異小，符合 GMP 對(duì)檢測(cè)方法穩(wěn)定性的要求。

單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定（MAT）是近年來(lái)熱原檢測(cè)領(lǐng)域的突破性技術(shù)，其原理基于人體免疫系統(tǒng)對(duì)熱原的天然應(yīng)答機(jī)制：人源單核細(xì)胞（如 THP-1 細(xì)胞系或新鮮人全血單核細(xì)胞）在熱原刺激下，會(huì)活化胞內(nèi)炎癥信號(hào)通路，釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細(xì)胞因子，通過(guò) ELISA 檢測(cè)細(xì)胞因子的濃度，即可間接反映樣品中熱原的總量與活性。與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，MAT 法具備三大不可替代的優(yōu)勢(shì)：一是廣譜性，可同時(shí)檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素、病毒、真菌毒素、支原體等所有類型熱原，填補(bǔ)了鱟試驗(yàn)法只能檢測(cè)內(nèi)毒素的 “非內(nèi)毒素?zé)嵩^(qū)”，尤其適用于疫苗、基因治療產(chǎn)品等易受多種熱原污染的高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品；二是人源相關(guān)性，采用與人體同源的細(xì)胞模型，檢測(cè)結(jié)果更貼近臨床實(shí)際熱原反應(yīng)，避免家兔試驗(yàn)中動(dòng)物種屬差異導(dǎo)致的誤判；三是高靈敏度，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)限可達(dá) 0.0125EU/mL，對(duì)非內(nèi)毒素?zé)嵩ㄈ缃湍付嗵?、腺病毒）的檢測(cè)限低至 ng/pg 級(jí)，滿足低限值產(chǎn)品的質(zhì)控需求。

MAT 法熱原檢測(cè)的關(guān)鍵機(jī)制是 “熱原活化單核細(xì)胞 TLR 受體，觸發(fā)炎癥因子分泌”，TLR 受體的全覆蓋是保障檢測(cè)無(wú)遺漏的關(guān)鍵。不同熱原需活化不同 TLR 受體：最常見(jiàn)的內(nèi)毒素（LPS）主要活化 TLR4，而革蘭氏陽(yáng)性菌的非內(nèi)毒素?zé)嵩ㄈ缰妆谒幔┬杌罨?TLR2/6，真菌多糖活化?TLR2/4，病毒核酸活化 TLR3/7/8 等。因此，MAT 試劑盒配套細(xì)胞需具備全覆蓋的 TLR 受體表達(dá)—湖州申科生物通過(guò) Western blot 驗(yàn)證，其 HL-60 細(xì)胞系表達(dá) TLR1-TLR9，可響應(yīng)各類熱原。為進(jìn)一步驗(yàn)證覆蓋能力，申科用不同非內(nèi)毒素?zé)嵩潴w（如脂磷壁酸、酵母多糖）刺激細(xì)胞，結(jié)果顯示所有配體均能誘導(dǎo) IL-6 分泌，且呈良好量效關(guān)系，證明試劑盒可檢出各類熱原。若細(xì)胞 TLR 受體覆蓋不全（如缺失 TLR2），則無(wú)法檢測(cè)革蘭氏陽(yáng)性菌的非內(nèi)毒素?zé)嵩?，?dǎo)致漏檢風(fēng)險(xiǎn)，因此 TLR 受體的全覆蓋是 MAT 法熱原檢測(cè)的關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)之一。