江蘇ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒開發要求

來源：發布時間：2025-10-14

美國藥典 <1132> 與歐洲藥典 < 2.6.34 > 建議，對即將進入商業化生產（臨床 III 期及后續階段）或生產工藝已穩定的生物制品，采用定制化 ELISA 試劑盒開展宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測，背后原因主要包括四點：①確保檢測方法能充分覆蓋實際工藝產生的 HCPs，防止漏檢關鍵雜質；②為更準確的免疫原性與安全性評估提供支持；③提供真實的工藝表征數據，而非推測性數據；④滿足商業化生產質量控制對方法一致性的要求。此外，研究人員對當前市場常見的 HCP ELISA 商業化試劑盒進行測試，并將其與 HCP ELISA 定制化試劑盒對比。實驗結果顯示，不同商業化試劑盒檢測同一樣品的數值差異明顯，且準確性均低于定制化試劑盒 —— 這一結果表明，定制化試劑盒更能滿足產品質量控制的實際需求。

不同技術平臺獲得的抗體覆蓋率水平不一樣，一般覆蓋率水平從高到低依次IMBS-MS>IMBS-2D>2D-Western Blot。江蘇ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒開發要求

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湖州申科生物憑借自主可控的供應鏈與經嚴格驗證的技術性能，確保 HCP 檢測試劑盒的長期穩定供應及出色分析能力。一方面，公司實現關鍵物料自研自產：校準品通過凍干工藝大規模生產，能穩定儲存 10 年以上；抗體經大動物免疫制備，產量可支撐≥10,000 盒試劑盒生產，確保同批次抗體連續供應超 10 年；試劑盒經多批次驗證，批內與批間一致性表現良好。另一方面，所有產品均參照 ICH Q2（R2）及 ICH M10 法規要求完成驗證：以大腸桿菌（E.coli）HCP 產品為例，其線性范圍（1-243 ng/mL）的 R2>0.999，各濃度點回收率偏差≤5%；準確度處于 81.2%-111.6% 區間，中間精密度 CV 值為 5.7%-12.4%；定量限（LLOQ）低至 1.5 ng/mL，且對 CHO、HEK293 等多種宿主細胞的交叉反應均低于檢測限。同時，借助二維電泳（檢出 826 個蛋白點）與質譜法（鑒定 2204 個蛋白點）對校準品進行雙重表征，并運用 IMBS-2D（覆蓋率 > 70%）與 IMBS-MS（覆蓋率 84.7%）正交技術驗證抗體覆蓋率，從源頭保障檢測結果的全面性與可靠性。

北京生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒開發要求篩選HCP試劑盒需考慮線性稀釋（一步法尤重）抗基質干擾穩定檢測值、批間一致性、工藝匹配性等因素。

宿主細胞蛋白（HCP）的來源中，常伴隨核酸、胞膜脂類及培養基中的氨基酸等非HCP成分，這些成分會干擾總蛋白檢測的準確性，因此在檢測前需開展純化前處理，同時對總蛋白檢測方法實施方法學確認。HCP本身屬于多蛋白混合物，不同總蛋白定量方法的檢測結果會存在一定差異，這也是造成HCP免疫檢測方法結果不一致的原因之一。若不同HCP蛋白定量方法的檢測結果差異較大，通常需同時采用2種及以上經確認的方法進行檢測，隨后取平均值。總蛋白檢測方法的定量限通常只能達到μg/mL級別，而HCP檢測試劑盒的產品校準品濃度則處于ng/mL級別。將HCP高濃度原液稀釋至低濃度產品校準品的過程中會產生稀釋誤差，因此需對產品校準品重新進行標定賦值。編輯分享用多種方法確認檢測結果時，如何選擇合適的方法組合？總蛋白檢測定量限與HCP校準品濃度差異大的原因是什么？有哪些方法可以降低非HCP成分對檢測的干擾？

定制化試劑盒之所以成為宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的優先選擇，關鍵原因之一是其構建的檢測體系更契合商業化生產中HCP工藝雜質的控制需求。在HCP校準品與HCP抗體這兩大關鍵試劑組分達標后，定制化方法的建立與優化會依托真實的純化中間品及原液樣品開展——通過優化檢測條件提升對低濃度HCP的檢測靈敏度，從而滿足工藝驗證與過程控制的需求。臨床三期階段需對生產工藝開展系統驗證，以保障其穩定性與可重復性，而定制化HCPELISA檢測方法能更準確地監測工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供堅實支撐。過程控制環節，借助工藝特異型HCP ELISA檢測方法，可實時監測生產過程中的HCP水平，擁有更強的生產異常預警能力，能及時排查生產風險，保障產品質量穩定。

不同培養工藝和產物表達影響 HCP 的數量和生化復雜性。

在宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方面，工藝特異型檢測試劑盒（upstream-process）專門針對特定生產工藝設計，其關鍵特征是依托產物的實際宿主細胞開展開發及驗證，通過模擬真實生產流程制備廣譜 HCP 抗原，且要求抗血清具備高覆蓋率以適配工藝變動，從而保障對特定生產流程中 HCP 殘留的高度準確監控。平臺型檢測試劑盒（platform）則由生產商圍繞特定表達宿主細胞及相近工藝自主開發，優勢體現在能借助相同參考標準品與試劑，統一監測基于該宿主細胞生產的不同產品，適用于上游工藝足夠相似的產品線。通用型檢測試劑盒（commercial）屬于市售廣譜檢測方案，適合相似宿主細胞的常規 HCP 檢測；但由于其制備過程未必能完全模擬目標產物的實際生產場景，因此需嚴格評估多克隆抗體對特定產品 HCP 的覆蓋率，以此確保檢測結果的可靠性。這三類試劑盒覆蓋了從深度定制到通用篩查的各類 HCP 檢測需求。

樣品與抗體的匹配程度對宿主細胞蛋白殘留檢測的結果影響很大。江蘇宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測性能驗證

湖州申科宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒校準品凍干保存，穩定性超 10 年，保障長期供應。江蘇ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒開發要求

LC-MS技術作為生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的新趨勢，應用時需重點考慮以下五方面：①穩定性：需對HCPs的LC-MS檢測流程開展驗證，全流程需實施嚴格QC管控，以保障檢測結果的一致性與穩定性。②可重復性：不同類型生物制品中HCPs的提取效率存在差異，且不同人員操作會產生偏差，因此需在上機前通過多種方法評估HCPs提取效率，規避人為因素導致的結果重復性不佳問題。③準確度：在方法開發與驗證階段，需設置內標并確定定量算法，通過內標響應回算得出HCPs含量，以此保證定量結果的準確性。④抗干擾能力：高豐度蛋白與特殊基質會干擾質譜檢測，需借助前處理手段去除高豐度蛋白或特殊基質，從而降低其對HCPs肽段質譜檢測的影響。⑤真實性：樣品中除HCPs外的其他物質在質譜分析中也會產生質譜信號，需去除復雜背景噪音以避免假陽性與假陰性情況，同時建立規范的生信分析流程。在分析流程搭建過程中，同樣需制定嚴格的QC標準，并通過后續多種方法驗證，明確該標準的真實性。

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標簽：內毒素檢測宿主細胞殘留DNA檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測熱原檢測支原體檢測

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