宿主細(xì)胞蛋白（HCP）是生物制品中源自細(xì)胞基質(zhì)的殘留雜質(zhì)，異質(zhì)性特征明顯。其復(fù)雜性主要體現(xiàn)在三方面：①理化特性差異：包含胞內(nèi)與分泌蛋白（涉及關(guān)鍵生理功能），等電點(diǎn)（pI 3-11）、分子量（5-250kDa）及疏水性的區(qū)間跨度大；②上游工藝影響：不同發(fā)酵工藝（如細(xì)胞株選擇、培養(yǎng)條件控制）會(huì)誘導(dǎo)獨(dú)特的翻譯后修飾（PTM），進(jìn)而增加 HCP 的總量與生化復(fù)雜性；③下游工藝與產(chǎn)物特性干擾：抗體、細(xì)胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝，會(huì)選擇性殘留特定 HCP；同時(shí)，產(chǎn)物形式（如大腸桿菌的包涵體 / 可溶性表達(dá)）也會(huì)直接影響 HCP 的殘留譜。針對(duì)特定生產(chǎn)工藝開(kāi)發(fā)定制化檢測(cè)方案，是準(zhǔn)確監(jiān)控 HCP 殘留的關(guān)鍵所在。

LC-MS/MS 作為成熟穩(wěn)定的蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，依托超高分辨率與準(zhǔn)確度，在生物分析領(lǐng)域中占據(jù)關(guān)鍵地位。該技術(shù)不僅可對(duì)低含量宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）開(kāi)展定性檢測(cè)，還能通過(guò)構(gòu)建專屬蛋白質(zhì)譜庫(kù)準(zhǔn)確鑒定 HCP 的具體種類，為深度解析殘留蛋白組成提供重要支撐。不過(guò)該技術(shù)應(yīng)用中面臨的主要挑戰(zhàn)，是如何優(yōu)化 LC-MS 方法以契合 GMP 規(guī)范對(duì)產(chǎn)品放行檢測(cè)的嚴(yán)苛要求。在質(zhì)譜檢測(cè)環(huán)節(jié)，引入表征明確的內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)蛋白，可準(zhǔn)確分析 HCPs 的整體組成，并有效識(shí)別其中具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開(kāi)發(fā)產(chǎn)品專屬 HCP ELISA 檢測(cè)方法提供有力數(shù)據(jù)支撐，還可助力工藝優(yōu)化升級(jí)，加快推進(jìn)生物制品從研發(fā)到獲批上市的全流程進(jìn)度。

湖州申科生物憑借自主可控的供應(yīng)鏈與經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證的技術(shù)性能，確保 HCP 檢測(cè)試劑盒的長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)及出色分析能力。一方面，公司實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵物料自研自產(chǎn)：校準(zhǔn)品通過(guò)凍干工藝大規(guī)模生產(chǎn)，能穩(wěn)定儲(chǔ)存 10 年以上；抗體經(jīng)大動(dòng)物免疫制備，產(chǎn)量可支撐≥10,000 盒試劑盒生產(chǎn)，確保同批次抗體連續(xù)供應(yīng)超 10 年；試劑盒經(jīng)多批次驗(yàn)證，批內(nèi)與批間一致性表現(xiàn)良好。另一方面，所有產(chǎn)品均參照 ICH Q2（R2）及 ICH M10 法規(guī)要求完成驗(yàn)證：以大腸桿菌（E.coli）HCP 產(chǎn)品為例，其線性范圍（1-243 ng/mL）的 R2>0.999，各濃度點(diǎn)回收率偏差≤5%；準(zhǔn)確度處于 81.2%-111.6% 區(qū)間，中間精密度 CV 值為 5.7%-12.4%；定量限（LLOQ）低至 1.5 ng/mL，且對(duì) CHO、HEK293 等多種宿主細(xì)胞的交叉反應(yīng)均低于檢測(cè)限。同時(shí)，借助二維電泳（檢出 826 個(gè)蛋白點(diǎn)）與質(zhì)譜法（鑒定 2204 個(gè)蛋白點(diǎn)）對(duì)校準(zhǔn)品進(jìn)行雙重表征，并運(yùn)用 IMBS-2D（覆蓋率 > 70%）與 IMBS-MS（覆蓋率 84.7%）正交技術(shù)驗(yàn)證抗體覆蓋率，從源頭保障檢測(cè)結(jié)果的全面性與可靠性。

湖州申科生物專注于提供契合嚴(yán)苛法規(guī)要求的宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA 檢測(cè)試劑盒，主要目標(biāo)是滿足抗體藥、疫苗等生物制品在 IND/BLA 申報(bào)階段的監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)。為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，公司搭建了全流程依規(guī)開(kāi)發(fā)的質(zhì)量管控體系 —— 整個(gè)開(kāi)發(fā)過(guò)程嚴(yán)格遵循 ISO 13485 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)能充分滿足用戶審計(jì)需求，從體系層面保障產(chǎn)品合規(guī)性。其開(kāi)發(fā)流程包含三大關(guān)鍵階段，前兩大基礎(chǔ)階段聚焦關(guān)鍵物料的品質(zhì)把控：一是 HCP 殘留定量檢測(cè)參考品開(kāi)發(fā)，重點(diǎn)是構(gòu)建可靠的 HCP 抗原參考品，需完成抗原表征、量值溯源與賦值、均一性驗(yàn)證及穩(wěn)定性考察等工作，為檢測(cè)準(zhǔn)確性與樣品代表性奠定基礎(chǔ)；二是高質(zhì)量大批量抗體制備，通過(guò)優(yōu)化的 HCP 抗原動(dòng)物免疫策略，搭配嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目贵w質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（含標(biāo)準(zhǔn)制定、覆蓋率驗(yàn)證）與穩(wěn)定的制備工藝，生產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的檢測(cè)抗體，確保后續(xù)檢測(cè)的特異性與靈敏度。

湖州申科生物參照 USP 通則 <1132.1> 的相關(guān)內(nèi)容，憑借公司在生物制品質(zhì)量控制領(lǐng)域十余年的深耕經(jīng)驗(yàn)，對(duì) LC-MS 檢測(cè) HCPs 的方法開(kāi)展評(píng)價(jià)與優(yōu)化。同時(shí)通過(guò)為 LC-MS 檢測(cè) HCPs 的整體流程構(gòu)建完整質(zhì)控體系，建立起一套抗干擾能力強(qiáng)、穩(wěn)定性佳、準(zhǔn)確度高且結(jié)果真實(shí)可靠的 LC-MS 檢測(cè) HCPs 標(biāo)準(zhǔn)方法。該檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)包含樣品制備、質(zhì)譜檢測(cè)、數(shù)據(jù)生信分析及質(zhì)譜結(jié)果方法驗(yàn)證四個(gè)部分，目前利用該 LC-MS 平臺(tái)已完成對(duì) 293T、不同工藝大腸桿菌（E.coli）、CHO、Vero、MDCK、Sf9 等不同工程細(xì)胞 HCPs 抗體覆蓋率的檢測(cè)分析。