北京細菌內毒素檢測抗干擾方案

來源：發(fā)布時間：2025-10-08

2024年7月26日，《美國藥典》微生物委員會正式宣布，將第<86>章“使用重組試劑的細菌內毒素測試”納入（USP-NF），該標準定于2025年5月正式生效。這一重要舉措不僅標志著細菌內毒素檢測領域從此正式邁入非動物源試劑的嶄新發(fā)展階段，更契合了全球生命科學領域遵循的3R原則（即通過非動物源技術替代動物實驗、減少實驗動物使用量、優(yōu)化實驗流程以降低動物痛苦）。此前傳統(tǒng)細菌內毒素檢測多依賴從鱟血中提取的試劑，而鱟作為海洋瀕危“活化石”，其資源保護與檢測需求間的矛盾長期存在；如今重組級聯(lián)試劑（rCR）憑借技術創(chuàng)新成功替代傳統(tǒng)鱟血，在有效守護藍血鱟的生態(tài)未來、緩解資源依賴困境的同時，也為藥品生產(chǎn)中的內毒素質量控制和用藥安全保障，提供了更先進、更穩(wěn)定且具備長期可持續(xù)性的解決方案。

細菌內毒素檢查有凝膠法和光度測定法，結果有爭議時，除規(guī)定外以凝膠限度試驗為準。北京細菌內毒素檢測抗干擾方案

湖州申科生物重組級聯(lián)試劑（rCR）采用基因工程技術合成，完全模擬了天然鱟試劑中的酶促級聯(lián)放大反應。重組鱟試劑反應體系中包含重組C因子、重組B因子和重組凝固酶原。當供試品中存在內毒素，重組C因子識別內毒素后活化，會依次級聯(lián)活化下游重組B因子和重組凝固酶原。凝固酶原轉化為具有生物活性的凝固酶后，識別并催化下游帶顯色基團的底物產(chǎn)生顯色反應。顯色反應的強度和內毒素濃度成正相關，從而定量檢測內毒素。本產(chǎn)品用于定量測定人用和動物用注射藥物、生物制品及醫(yī)療器械等樣品中的細菌內毒素的含量。

廣東細菌內毒素檢測方法驗證在醫(yī)藥、生物制品及醫(yī)療器械等諸多領域，細菌內毒素檢測是保障產(chǎn)品質量與安全的關鍵環(huán)節(jié)。

樣品中的高滲透性成分（如高濃度鹽、糖）會通過改變反應體系滲透壓，抑制鱟試劑反應，影響內毒素檢測結果。例如，濃度為 70% 的葡萄糖溶液、高濃度氯化鈉溶液等，會形成高滲透壓環(huán)境，導致鱟試劑中的蛋白質脫水變性，喪失酶活性，進而使內毒素無法被正常檢測，出現(xiàn)假陰性。這類高滲透性基質的干擾機制明確 —— 通過破壞蛋白質結構影響酶促反應，且干擾程度與濃度正相關。為消除這類干擾，解決方案是使用內毒素檢查用水稀釋樣品：根據(jù)樣品滲透性高低，逐步稀釋至適宜濃度（通常需稀釋至滲透壓與生理鹽水接近），降低對蛋白質的脫水作用，恢復鱟試劑中酶的活性。稀釋過程中需注意，稀釋倍數(shù)需在方法驗證確定的 “無干擾稀釋范圍” 內，避免因過度稀釋導致內毒素濃度低于檢測限，確保內毒素檢測既能規(guī)避高滲透性抑制，又能準確捕捉微量內毒素。

重組級聯(lián)試劑（rCR）通過完整模擬天然鱟試劑的酶促級聯(lián)反應路徑，實現(xiàn)高效且特異的內毒素檢測。其反應機制為：內毒素首先活化重組 C 因子，活化的 C 因子進一步活化重組 B 因子，隨后活化重組凝固酶原轉化為凝固酶，再催化顯色底物產(chǎn)生黃色信號（405nm 波長可檢測）。這一級聯(lián)放大過程有效提升了檢測靈敏度，即使微量內毒素也能產(chǎn)生可識別信號。與單因子的重組 C 因子法（rFC）相比，rCR 的多因子級聯(lián)反應抗干擾能力更強，尤其對復雜基質樣品（如高蛋白單抗、疫苗）表現(xiàn)更優(yōu)。同時，rCR 剔除了天然鱟試劑中的 G 因子，避免了與 β-D 葡聚糖的非特異性反應，從根本上減少假陽性結果，保障檢測數(shù)據(jù)的可靠性。

繪制內毒素標準曲線時，起始濃度需統(tǒng)一為 1000EU/mL，避免稀釋誤差。

《中國藥典》對內毒素檢測提出了非常嚴格的要求，以確保藥品的質量和安全性。湖州申科生物提供一系列高質量的細菌內毒素檢測產(chǎn)品，旨在為實驗室和工廠生產(chǎn)提供準確、快速的檢測方案，產(chǎn)品涵蓋了凝膠法鱟試劑、動態(tài)顯色法鱟試劑、重組C因子法（rFC）和重組級聯(lián)試劑（rCR）、無熱原吸頭、內毒素檢查用水、自動化設備、內毒素工作標準品、內毒素指示劑等多種產(chǎn)品，滿足不同場景下的需求，同時可為復雜樣品基質的內毒素檢測提供解決方案。

β- 葡聚糖刺激 G 因子致假陽性，用含抗增液的鱟試劑可優(yōu)化內毒素檢測結果。非動物源內毒素檢測技術服務

重組級聯(lián)試劑（rCR）推動內毒素檢測向可持續(xù)發(fā)展轉型，兼顧生態(tài)保護與藥品安全質控。北京細菌內毒素檢測抗干擾方案

內毒素檢測重組級聯(lián)試劑（rCR）在方法橋接方面具有明顯優(yōu)勢，可大幅度降低實驗室的轉換成本。在設備兼容性上，rCR 無需額外采購新設備，完全適配天然鱟動態(tài)顯色法現(xiàn)用的酶標儀（如 Molecular Devices、Tecan sunrise、Thermo MultiSkan ET 等品牌），支持 405nm 波長動態(tài)讀數(shù)和 37℃恒溫孵育。操作流程上，rCR 的樣品處理、試劑混合、加樣孵育等步驟與天然鱟試劑一致，實驗室無需重新培訓操作人員或修改 SOP。顯色系統(tǒng)方面，rCR 沿用與天然試劑相同的 PNA 顯色底物，通過黃色信號變化定量，檢測原理和數(shù)據(jù)分析方法保持不變。這種高度兼容性使實驗室能快速完成方法驗證和切換，加速重組試劑的合規(guī)應用進程。

北京細菌內毒素檢測抗干擾方案

標簽：支原體檢測宿主細胞殘留DNA檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測熱原檢測內毒素檢測

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