時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移（TR-FRET）原理為具有長壽命熒光(通常為100秒的毫秒至毫秒)的鑭系配合物用作FRET供體，熒光蛋白或有機(jī)熒光團(tuán)(例如，別藻藍(lán)素或Cy5)用作受體。普通熒光的半衰期為納秒級(jí)，鑭系元素的半衰期為毫秒級(jí)，有6個(gè)數(shù)量級(jí)的差別。所以在檢測(cè)時(shí)，TR-FRET有一個(gè)時(shí)間延遲～100微秒，從而使反應(yīng)體系內(nèi)普通背景熒光信號(hào)消耗掉，因此TR-FRET的背景信號(hào)非常低，能夠反映樣品實(shí)際情況。基于細(xì)胞水平的篩選的關(guān)鍵特征之一是可以一次篩選多個(gè)靶標(biāo)。基于細(xì)胞的篩選常用于以下情況下：1)所需的分子靶標(biāo)未知，2)靶標(biāo)無法在生化測(cè)定中充分重組，3)所需的表型只存在于細(xì)胞環(huán)境中，例如從一種細(xì)胞類型分化到另一種細(xì)胞類型。基于細(xì)胞的檢測(cè)貫穿于藥物發(fā)現(xiàn)的所有階段：靶標(biāo)選擇和驗(yàn)證、初步篩選、先導(dǎo)化合物識(shí)別、先導(dǎo)化合物優(yōu)化以及安全和毒理學(xué)篩選。介紹一些細(xì)胞水平分析的方法：細(xì)胞活力、報(bào)告基因、第二信使和高內(nèi)涵成像等。高通量篩選藥物分析儀。河南炎癥高通量篩選

高通量篩選的實(shí)驗(yàn)方法分子水平和細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)方法（或稱篩選模型）是實(shí)現(xiàn)藥物高通量篩選的技術(shù)基礎(chǔ)。由于藥物高通量篩選要求同時(shí)處理大量樣品，實(shí)驗(yàn)體系必須微量化，而這些微量化的實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)根據(jù)新的科研成果來建立。第四軍醫(yī)大學(xué)周四元研究認(rèn)為，藥物高通量篩選模型的實(shí)驗(yàn)方法，根據(jù)其生物學(xué)特點(diǎn)，可分為以下幾類：受體結(jié)合分析法；酶活性測(cè)定法；細(xì)胞分子測(cè)定法；細(xì)胞活性測(cè)定法；代謝物質(zhì)測(cè)定法；基因產(chǎn)物測(cè)定法。這些實(shí)驗(yàn)方法，均已用于藥物高通量篩選中。河南炎癥高通量篩選高通量篩選的具備條件。

高通量篩選的特色效用高通量篩選技術(shù)是將多種技術(shù)方法有機(jī)結(jié)合而形成的一種新技術(shù)體系，它以微板形式作為實(shí)驗(yàn)工具載體，以自動(dòng)化操作系統(tǒng)執(zhí)行實(shí)驗(yàn)過程，以靈敏快速的檢測(cè)儀器采集實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以計(jì)算機(jī)對(duì)數(shù)以千計(jì)的樣品數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，從而得出科學(xué)準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和特色效用。英國學(xué)者AlanD研究提示，一個(gè)實(shí)驗(yàn)室采用傳統(tǒng)的方法，借助20余種藥物作用靶位，1年內(nèi)能篩選75000個(gè)樣品；1997年高通量篩選技術(shù)發(fā)展初期，采用100余種靶位，每年可篩選100萬個(gè)樣品；1999年高通量篩選技術(shù)進(jìn)一步完善后，每天的篩選量就高達(dá)10萬種化合物。

高通量篩選技術(shù)，是目前藥物篩選領(lǐng)域研究的重要課題，近年來，對(duì)它的研究應(yīng)用雖然已取得了長足的發(fā)展，但仍然存在許多難題，如體外模型的篩選結(jié)果與整體藥理作用的關(guān)系；對(duì)高通量篩選模型的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以及新的藥物作用靶點(diǎn)的研究和發(fā)現(xiàn)等。隨著醫(yī)藥學(xué)的進(jìn)步，高通量篩選技術(shù)在創(chuàng)新藥物的研發(fā)中，一定會(huì)開拓出更廣闊的空間。我國進(jìn)行藥物高通量篩選的優(yōu)勢(shì)首先是化合物來源，且多為天然；其次是對(duì)化合物生物活性的篩選目的較明確，無目的合成的化合物較少；第三，我國傳統(tǒng)藥物為篩選研究提供了一個(gè)巨大的資源庫，可從中藥中提取分離篩選新的化合物。這些優(yōu)勢(shì)為藥物的高通量篩選打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。高通量篩選的常見問題。

正如之前提到，在高通量篩選中Assay的檢出方法有很多，用于衡量酶活性多的當(dāng)屬于熒光檢出法和吸光度檢出法。這兩種方法都能非常便捷的與高通量進(jìn)行匹配。但是這兩種檢出方法也有不適用的場(chǎng)景，比如吸光度檢出法，在終點(diǎn)法測(cè)定（endpointassay）時(shí)，如果化合物庫的吸收低于~410nm，實(shí)驗(yàn)的背景吸收會(huì)引入假陽性（false-positive）和假陰性（false-negative）結(jié)果。雖然假陽性結(jié)果可以通過動(dòng)力學(xué)Assay或者驗(yàn)證Assay來解決，但是由于微量定量板有位于340~410nm的強(qiáng)吸收，所以仍舊會(huì)導(dǎo)致Z因子降低，直接結(jié)果就是較弱活性的苗頭化合物將很難被篩選出來。而對(duì)于熒光檢出法而言，自發(fā)熒光化合物庫或者具有光敏特性的化合物庫同樣會(huì)遇到假陽性和假陰性結(jié)果。在某種程度上，選擇合適的檢出方法可以減少甚至避免上述問題，比如使用更長波段的光源，對(duì)于熒光檢出來說，>500nm會(huì)是比較好的選擇。高通量篩選菌種技術(shù)。河南炎癥高通量篩選

高通量篩選的主要目的是什么。河南炎癥高通量篩選

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）是指在兩個(gè)不同的熒光基團(tuán)中，如果一個(gè)熒光基團(tuán)（供體Donor）的發(fā)射光譜與另一個(gè)基團(tuán)（受體Acceptor）的吸收光譜有一定的重疊，當(dāng)這兩個(gè)熒光基團(tuán)間的距離合適時(shí)，就可觀察到熒光能量由供體向受體轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，即以前一種基團(tuán)的激發(fā)波長激發(fā)時(shí)，可觀察到后一個(gè)基團(tuán)發(fā)射的熒光。常見的供體-受體對(duì)之間的有效距離通常為2-6nm，適用于許多蛋白質(zhì)相互作用。染料通常是有機(jī)分子，如與蛋白質(zhì)偶聯(lián)的熒光素和羅丹明，或與感興趣的蛋白質(zhì)融合的熒光蛋白。河南炎癥高通量篩選