不同選擇性的色譜固定相 　　由于反相色譜分離基于多種作用力的結果，不同鍵合相或同一種鍵合相但不同的硅膠基質、封端技術和鍵合技術，其疏水作用、空間位阻、氫鍵作用、靜電作用、π-π作用、偶極-偶極作用等能力不同，對化合物的分離能力不同，故而表現出不一樣的選擇性。比如，在碳鏈中嵌入極性的酰胺基團，不僅能夠使鍵合相的水相兼容性增加，而且可以提高化合物與固定相之間的氫鍵作用能力，使之獲得與普通C18 填料不一樣的選擇性。這樣的色譜柱有ZORBAX Bonus RP 和Waters Symmetry shield 等。Huawei Gu等利用Bonus RP 色譜柱與其他常規碳鏈反相色譜柱選擇性的不同，使用二維液相色譜實現復雜體系的分離。又如，苯基柱可以提供π-π 作用，用于含有苯環或能提供π 鍵作用的結構類似物分析;而五氟苯基(Penta Fluorophenyl Propyl，PFP)柱(則除了提供π-π 作用外，還可以提供偶極作用、靜電作用等，提高了苯環上位置異構體的分辨能力。口碑好液相色譜填料

液相色譜填料技術進展 　　2　液相色譜填料技術進展 　　近年來，液相色譜填料技術的發展主要在于快速液相色譜分析、多種色譜固定相及各種分離模式的應用。 　　2.1　基于亞2微米填料的高效液相色譜柱技術 　　范氏(Van Demeter)方程是一個描述線速度與塔板高度(柱效)關系的經驗式。在范氏方程中，填料粒徑大小是影響塔板高度的變量之一(圖2)，因此，提高分離效能的有效方法之一是減小填粒粒徑。較小粒徑的填料有利于降低渦流擴散及改變傳質路徑，不僅使柱效更高，而且即使在較高的線速度下，理論塔板高度也不會增大，使色譜柱的分離性能得以保持，并有效地縮短分析時間和減少溶劑消耗，更加綠色環保。2000年前，人們專注于鍵合相類型的開發。2003 年，在匹茲堡展會(Pittcon 2003)上展出了1.8 μm 的ZORBAX STM(亞2微米，SB-C18柱)快速分析色譜柱，該色譜柱柱效是常規3.5μm 色譜柱的2倍，開啟了液相色譜更快速分析的新篇章。同時，耐壓能力達60 MPa甚至120 MPa的超高效液相色譜儀的逐步推出，使得采用小粒徑色譜柱，通過提高流速加快分析速度，能有效提高分辨率和靈敏度，從而使得諸多復雜體系的分離成為可能。如今，以亞2 微米填料為填充劑的高效液相色譜柱成都液相色譜填料銷售廠家

多種分離模式的應用 　LCCC 法是根據聚合物的功能基團、嵌段結構的差異進行聚合物分離的一種色譜技術。LCCC 法的原理是基于臨界點之上、臨界點之下以及臨界點附近的標度理論。當使用多孔填充材料作為固定相時，分子排阻色譜(size exclusion chromatography，SEC)和相互作用色譜(interaction chromatography，IC)的分離機制在分離聚合物時同時發生作用。在某個特殊色譜條件(固定相、流動相組成、溫度)下，存在2 種分離機制的臨界點，被稱為焓熵互補點或色譜臨界條件(critical conditions)或臨界吸附點(critical adsorption　point，CAP)。在這一點，聚合物分子按照分子末端功能基團的不同或嵌段結構的差異分離，與分子的聚合物摩爾質量(分子量)無關，聚合物的洗脫體積等于色譜柱的空隙體積。目前，這一技術成功用于脂溶性聚合物的分析，對于水溶性聚合物的應用研究有待深入和擴展。為適應大分子量聚合物的分離需要，比常規孔徑、粒徑大得多的填料和更寬柱徑的色譜柱也應隨之出現。

不同選擇性的色譜固定相 一般硅膠基質填料的固定相其pH適用范圍為2~8。為提高硅膠基質的填料鍵合相在酸性條件下的穩定性，一般在碳鏈的硅烷基側鏈上采用大體積的有機基團進行保護，比如采用雙異丁基或雙異丙基的側鏈保護，使得此類色譜填料能夠穩定地用于pH0.8~8 的流動相體系中，而不會導致硅烷鍵的流失。如中國藥典方法中，洛伐他汀、氫溴酸右美沙芬等在較低pH 條件下，使用這類的色譜柱可以獲得較好的耐用性。 　　在提高硅膠基質填料堿性穩定性方面，除了使用致密鍵合、雙配位鍵合以及雙重封端等技術，還使用硅膠- 有機雜化顆粒，或者在硅膠表面進行聚合物包覆，提高硅膠在堿性條下的穩定性，同時降低硅　　醇基在堿性條件下的解離，避免堿性化合物拖尾。近期推出能夠耐受高pH 穩定性的Poroshell HPH-C18(2.7 μm)和C8 填料(4 μm)，這種填料兼顧了表面多孔型填料和硅膠表面有機雜化的優勢，具有高柱效、寬pH 耐受范圍(2~11)的優勢。

液相色譜填料技術進展 正在得到更的應用，例如，使用1.8 μm 的C18 色譜柱分析《中國藥典》2015 年版一部中的復方丹參滴丸指紋圖譜，其時間可以控制在10 min 以內中國藥典對亞2 微米色譜柱技術革新和應用給予高度的關注，適時地修訂了液相色譜法的相關內容。中國藥典2015 年版四部通則0512 色譜法規定，若需使用小粒徑(約2μm)填充劑，輸液泵的性能、進樣體積、檢測池體積和系統的死體積等必須與之匹配;如有必要，色譜條件也應作適當的調整。當對其測定結果產生爭議時，應以品種項下規定的色譜條件的測定結果為準。廈門直銷液相色譜填料

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表面多孔型填料技術 　　表面多孔型顆粒填料(superficially porous particles，SPPs)又稱核- 殼型填料(core shell particles)，商品化的產品有5μm的Poroshell 300 SB C18，該填料采用4.5 μm的硅膠實心內核，外面包裹一層0.25μm的多孔層，平均孔徑為300 ，主要用于蛋白質和單抗的快速分析。由于表面多孔型填料具有極窄的粒徑分布和擴散路徑，同時可以減小渦流擴散，縮短傳質路徑和減弱傳質阻力，即便使用較粗的填料顆粒也可獲得較高的柱效。目前，一般使用亞3μm 的表面多孔型填料(2.6~2.7 μm)，即可獲得亞2微米填料的柱效。這種顆粒一般采用1.7 μm 的實心核，外部為0.5 μm 厚度的全多孔層，它們具有亞2 微米全多孔填料色譜柱相當的柱效，而其柱壓*為亞2 微米全多孔填料的一半，見圖2 中色譜柱柱效與顆粒粒徑的關系。此類色譜柱一般操作壓力在20 MPa 左右，故可以在耐壓40 MPa 的普通液相色譜系統上運行，使得普通液相色譜儀實現快速分析成為現實。這種填料在過去5年里是液相色譜領域發展最快的一種填料類型，發展非常迅速，2010 年時只有3 家色譜廠商提供2.7μm 粒徑的表面多孔型填料用于小分子化合物分析，2015年底則發展到了16家，鍵合相的類型超過了12 種口碑好液相色譜填料

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