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成都專業(yè)蛋白純化填料

來源: 發(fā)布時(shí)間:2020-05-10

蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細(xì)純化階段二個(gè)階段。一般蛋白純化采用的方法為樹脂法。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細(xì)胞成分如DNA、RNA等分開,由于此時(shí)樣本體積大、成分雜,要求所用的樹脂高容量、高流速、顆粒大、粒徑分布寬.并可以迅速將蛋白與污染物分開,必要時(shí)可加入相應(yīng)的保護(hù)劑(例如蛋白酶抑制劑),防止目的蛋白被降解。精細(xì)純化階段則需要更高的分辨率,此階段是要把目的蛋白與那些分子量大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來,要用更小的樹脂顆粒以提高分辨率,常用離子交換柱和疏水柱,應(yīng)用時(shí)要綜合考慮樹脂的選擇性和柱效兩個(gè)因素。選擇性指樹脂與目的蛋白結(jié)合的特異性,柱效則是指各蛋白成分逐個(gè)從樹脂上集中洗脫的能力,洗脫峰越窄,柱效越好。*有好的選擇性,洗脫峰太寬,蛋白照樣不能有效分離。成都專業(yè)蛋白純化填料

通常要將有機(jī)溶劑冷卻,然后在不斷攪拌下加入有機(jī)溶劑防止局部濃度過高,蛋白質(zhì)變性問題就可以很大程度上得到解決。對(duì)于一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中極性側(cè)鏈較多、不溶于水的蛋白質(zhì),可以用乙醇、**和丁醇等有機(jī)溶劑提取,它們有一定的親水性和較強(qiáng)的親脂性,是理想的提取液。冷乙醇分離法提取免疫球蛋白**早由Cohn于1949年提出,用于制備丙種球蛋白。冷乙醇法也是WHO規(guī)程和中國生物制品規(guī)程推薦的方法,不僅分辨率高、提純效果好、可同時(shí)分離多種成分,而且有抑菌、***的作用。成都專業(yè)蛋白純化填料

一、根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同的分離 1、蛋白質(zhì)的鹽析法:中性鹽對(duì)蛋白質(zhì)的溶解度有明顯影響,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,蛋白質(zhì)的溶解度增加,此稱鹽溶;當(dāng)鹽濃度繼續(xù)升高時(shí),蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現(xiàn)象稱鹽析。 2、等電點(diǎn)沉淀法:蛋白質(zhì)在靜電狀態(tài)時(shí)顆粒之間的靜電斥力**小,因而溶解度也**小,各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)有差別,可利用調(diào)節(jié)溶液的pH達(dá)到某一蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)使之沉淀,但此法很少單獨(dú)使用,可與鹽析法結(jié)合用。

蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣,是一項(xiàng)重要的操作技術(shù)。 一個(gè)典型的真核細(xì)胞可以包含數(shù)以千計(jì)的不同蛋白質(zhì),一些含量十分豐富,一些*含有幾個(gè)拷貝。為了研究某一個(gè)蛋白質(zhì),必須首先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來。 蛋白純化要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異,利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染,而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì)有差異,利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。

分離純化某種蛋白質(zhì),首先要把蛋白質(zhì)從原來的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來并保持原來的天然狀態(tài),不丟失生物活性。為此,動(dòng)物材料應(yīng)先剔除結(jié)締組織和脂肪組織,種子材料應(yīng)先去殼甚至去種皮以免受單寧等物質(zhì)的污染,油料種子比較好先用低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑等脫脂。然后根據(jù)不同的情況,選擇適當(dāng)?shù)姆椒ǎ瑢⒔M織和細(xì)胞破碎。動(dòng)物組織和細(xì)胞可用電動(dòng)搗碎機(jī)或勻漿機(jī)破碎或用超聲波處理破碎。植物組織和細(xì)胞由于具有纖維素、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細(xì)胞壁,一般需要用石英砂或玻璃粉和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ɑ蛴美w維素酶處理也能達(dá)到目的。細(xì)菌細(xì)胞的破碎比較麻煩,因?yàn)檎麄€(gè)細(xì)菌細(xì)胞壁的骨架實(shí)際上是一個(gè)借共價(jià)鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子,非常堅(jiān)韌。破碎細(xì)菌細(xì)胞壁的常用方法有超聲波破碎,與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等。組織和細(xì)胞破碎后,選擇適當(dāng)?shù)木彌_液把所要的蛋白提取出來。細(xì)胞碎片等不溶物用離心或過濾的方法除去。廈門蛋白純化填料

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