表面多孔型填料技術 　　表面多孔型顆粒填料(superficially porous particles，SPPs)又稱核- 殼型填料(core shell particles)，商品化的產品有5μm的Poroshell 300 SB C18，該填料采用4.5 μm的硅膠實心內核，外面包裹一層0.25μm的多孔層，平均孔徑為300 ，主要用于蛋白質和單抗的快速分析。由于表面多孔型填料具有極窄的粒徑分布和擴散路徑，同時可以減小渦流擴散，縮短傳質路徑和減弱傳質阻力，即便使用較粗的填料顆粒也可獲得較高的柱效。目前，一般使用亞3μm 的表面多孔型填料(2.6~2.7 μm)，即可獲得亞2微米填料的柱效。這種顆粒一般采用1.7 μm 的實心核，外部為0.5 μm 厚度的全多孔層，它們具有亞2 微米全多孔填料色譜柱相當的柱效，而其柱壓*為亞2 微米全多孔填料的一半，見圖2 中色譜柱柱效與顆粒粒徑的關系。此類色譜柱一般操作壓力在20 MPa 左右，故可以在耐壓40 MPa 的普通液相色譜系統上運行，使得普通液相色譜儀實現快速分析成為現實。這種填料在過去5年里是液相色譜領域發展最快的一種填料類型，發展非常迅速，2010 年時只有3 家色譜廠商提供2.7μm 粒徑的表面多孔型填料用于小分子化合物分析，2015年底則發展到了16家，鍵合相的類型超過了12 種甘肅液相色譜填料

液相色譜填料技術進展 正在得到更的應用，例如，使用1.8 μm 的C18 色譜柱分析《中國藥典》2015 年版一部中的復方丹參滴丸指紋圖譜，其時間可以控制在10 min 以內中國藥典對亞2 微米色譜柱技術革新和應用給予高度的關注，適時地修訂了液相色譜法的相關內容。中國藥典2015 年版四部通則0512 色譜法規定，若需使用小粒徑(約2μm)填充劑，輸液泵的性能、進樣體積、檢測池體積和系統的死體積等必須與之匹配;如有必要，色譜條件也應作適當的調整。當對其測定結果產生爭議時，應以品種項下規定的色譜條件的測定結果為準。質量液相色譜填料制造廠家

多種分離模式的應用 　LCCC 法是根據聚合物的功能基團、嵌段結構的差異進行聚合物分離的一種色譜技術。LCCC 法的原理是基于臨界點之上、臨界點之下以及臨界點附近的標度理論。當使用多孔填充材料作為固定相時，分子排阻色譜(size exclusion chromatography，SEC)和相互作用色譜(interaction chromatography，IC)的分離機制在分離聚合物時同時發生作用。在某個特殊色譜條件(固定相、流動相組成、溫度)下，存在2 種分離機制的臨界點，被稱為焓熵互補點或色譜臨界條件(critical conditions)或臨界吸附點(critical adsorption　point，CAP)。在這一點，聚合物分子按照分子末端功能基團的不同或嵌段結構的差異分離，與分子的聚合物摩爾質量(分子量)無關，聚合物的洗脫體積等于色譜柱的空隙體積。目前，這一技術成功用于脂溶性聚合物的分析，對于水溶性聚合物的應用研究有待深入和擴展。為適應大分子量聚合物的分離需要，比常規孔徑、粒徑大得多的填料和更寬柱徑的色譜柱也應隨之出現。

整體化色譜柱填料技術 　　整體化色譜柱(monolithic column)也是近年液相色譜柱填料研究的另一個重要方向。整體柱，又稱為棒狀柱，是一種用有機或無機聚合方法在色譜柱內進行原位聚合的連續床固定相。與常規裝填的液相色譜柱相比，整體柱具有更好的多孔性和滲透性，可以使用高流速實現快速的傳質分離。聚合物整體柱一般采用離子交換或親和色譜方式，用于生物大分子如蛋白、抗體、DNA 的超快速分析，這樣的色譜柱包括Bio-Monolith 離子交換柱和Protein A、Protein G 親和色譜柱，以及ThermoroSwift IEX 離子交換柱和ProSwift RP 柱。使用此類整體化色譜柱分析大分子物質時，分離通常可以在幾分鐘內完成。無機基質的整體柱一般采用硅膠以及在硅膠表面鍵合的反相填料，柱床中既有供流動相流過的粗孔(約2 μm)，又有便于溶質進行傳質的中孔(幾十個納米)，如圖5(來源于Merck 的目錄資料)所示。市場上商品化的整體柱產品不多，如Chromolith? 整體柱，該柱子具有非常低的柱壓和較高的基質耐受能力，因此在普通高效液相色譜儀以及超高效液相色譜儀上都可以兼容。

液相色譜填料技術進展 　　2　液相色譜填料技術進展 　　近年來，液相色譜填料技術的發展主要在于快速液相色譜分析、多種色譜固定相及各種分離模式的應用。 　　2.1　基于亞2微米填料的高效液相色譜柱技術 　　范氏(Van Demeter)方程是一個描述線速度與塔板高度(柱效)關系的經驗式。在范氏方程中，填料粒徑大小是影響塔板高度的變量之一(圖2)，因此，提高分離效能的有效方法之一是減小填粒粒徑。較小粒徑的填料有利于降低渦流擴散及改變傳質路徑，不僅使柱效更高，而且即使在較高的線速度下，理論塔板高度也不會增大，使色譜柱的分離性能得以保持，并有效地縮短分析時間和減少溶劑消耗，更加綠色環保。2000年前，人們專注于鍵合相類型的開發。2003 年，在匹茲堡展會(Pittcon 2003)上展出了1.8 μm 的ZORBAX STM(亞2微米，SB-C18柱)快速分析色譜柱，該色譜柱柱效是常規3.5μm 色譜柱的2倍，開啟了液相色譜更快速分析的新篇章。同時，耐壓能力達60 MPa甚至120 MPa的超高效液相色譜儀的逐步推出，使得采用小粒徑色譜柱，通過提高流速加快分析速度，能有效提高分辨率和靈敏度，從而使得諸多復雜體系的分離成為可能。如今，以亞2 微米填料為填充劑的高效液相色譜柱湖南液相色譜填料

甘肅液相色譜填料

不同選擇性的色譜固定相 　　由于反相色譜分離基于多種作用力的結果，不同鍵合相或同一種鍵合相但不同的硅膠基質、封端技術和鍵合技術，其疏水作用、空間位阻、氫鍵作用、靜電作用、π-π作用、偶極-偶極作用等能力不同，對化合物的分離能力不同，故而表現出不一樣的選擇性。比如，在碳鏈中嵌入極性的酰胺基團，不僅能夠使鍵合相的水相兼容性增加，而且可以提高化合物與固定相之間的氫鍵作用能力，使之獲得與普通C18 填料不一樣的選擇性。這樣的色譜柱有ZORBAX Bonus RP 和Waters Symmetry shield 等。Huawei Gu等利用Bonus RP 色譜柱與其他常規碳鏈反相色譜柱選擇性的不同，使用二維液相色譜實現復雜體系的分離。又如，苯基柱可以提供π-π 作用，用于含有苯環或能提供π 鍵作用的結構類似物分析;而五氟苯基(Penta Fluorophenyl Propyl，PFP)柱(則除了提供π-π 作用外，還可以提供偶極作用、靜電作用等，提高了苯環上位置異構體的分辨能力。甘肅液相色譜填料

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