免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）的實驗方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準備
2. 蛋白質濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質的濃度。
3. 抗體預處理：如果使用預固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
4. 免疫沉淀反應：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標蛋白質充分結合。
5. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結合的蛋白A或蛋白G結合的固相支持物。
6. 洗滌：去除未結合的蛋白質和雜質，通常需要多次洗滌固相支持物。
7. 洗脫：使用適當的洗脫緩沖液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復合物。
8. 后續分析：對洗脫的蛋白質進行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質譜分析等，以進一步分析目標蛋白質。
免疫沉淀選瓊脂糖珠還是磁珠？IP免疫沉淀磁珠哪個公司好用
免疫沉淀實驗步驟：
1. 樣品制備
a. 懸浮細胞樣品處理：離心收集細胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應在使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）。混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
b. 貼壁細胞樣品處理：移去培養基，用PBS清洗細胞兩遍；用細胞刮棒刮脫細胞，收集至1.5mL EP管內，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應在使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）。吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
4. 后續：磁珠預處理——抗體吸附——抗原結合反應——抗體洗脫
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免疫沉淀Co-IP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結構 (直徑 50-150 μm) 可以結合抗體 (繼而結合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結合抗體，而不需借助特殊的專業設備。瓊脂糖珠呈多孔結構，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質相互接觸，具有更高的結合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結合能力，但每體積的磁珠數量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結合表面積滿足高容量的抗體結合。
簡而言之，瓊脂糖珠的結合能力較強，而磁珠在得率，可重復性以及自動化方面有明顯的優勢。
免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質相互作用和蛋白質特性的重要方法。它具有一些明顯的優點，但也存在一些局限性。
優點:
1. 特異性強：IP技術利用特異性抗體對目標蛋白進行捕獲，因此具有很高的特異性。
2. 富集低豐度蛋白：可以從小量樣本中富集低豐度的目標蛋白，有助于研究稀有蛋白。
3. 研究蛋白質相互作用：通過Co-IP等變體技術，可以研究蛋白質之間的相互作用。
4. 操作簡便：IP實驗步驟相對簡單，容易在實驗室中實施。
缺點:
1. 對抗體質量依賴性高：需要高質量的特異性抗體，否則可能導致假陽性或實驗失敗。
2. 存在非特異性結合：樣本中的其他蛋白質可能非特異性地結合到抗體或固相載體上。
3. 可能破壞蛋白質的天然構象：裂解和洗滌步驟可能破壞蛋白質的天然結構，影響其功能。
4. 可能存在背景噪聲：非特異性結合可能導致背景噪聲，影響結果的清晰度和解釋。
免疫沉淀技術RIP的實驗設計。
免疫沉淀技術（Immunoprecipitation，簡稱IP）是一種生物學實驗方法，用于從細胞或組織裂解物中分離和純化特定蛋白質。這項技術依賴于抗體的高度特異性，通過抗體與目標蛋白質的結合，實現對目標蛋白質的富集和純化。
具體操作步驟通常包括以下幾個階段：裂解細胞或組織，抗體與蛋白質結合，固相支持物的使用，免疫復合物的捕獲，洗滌，洗脫分析。
免疫沉淀技術不僅可以用于檢測蛋白質的存在和量，還可以用于研究蛋白質的翻譯后修飾、蛋白質-蛋白質相互作用、蛋白質穩定性以及蛋白質的功能等。此外，免疫沉淀技術是許多其他高級實驗技術的基礎，如染色質免疫沉淀測序（ChIP-Seq）和蛋白質相互作用網絡分析等。
免疫沉淀的原理是什么？溫州IP免疫沉淀實驗原理
免疫沉淀技術Co-IP的實驗設計。IP免疫沉淀磁珠哪個公司好用
ChIP（染色質免疫沉淀）實驗是一種用于研究蛋白質與DNA相互作用的技術。以下是ChIP實驗的實驗設計概述：
1. 目標蛋白的選擇：確定您想要研究的目標蛋白，例如特定的轉錄因子或組蛋白修飾。
2. 樣本的準備：根據研究的需要選擇合適的細胞或組織樣本。
3. 抗體的選擇：選擇具有高特異性和親和力的抗體，這對于實驗的成功至關重要。
4. 交聯：使用甲醛等交聯劑將蛋白質與DNA在體內共價結合，形成穩定的蛋白質-DNA復合物。
5. 細胞裂解：裂解細胞以釋放染色質，同時保持蛋白質-DNA復合物的完整性。
6. 染色質的剪切：通過超聲或酶消化將染色質剪切成適當大小的片段，通常在200-1000 bp之間。
7. 免疫沉淀：使用特定抗體與目標蛋白結合，然后利用蛋白A/G磁珠沉淀復合物。
8. 洗滌和洗脫：洗滌沉淀物以去除未特異性結合的蛋白質和DNA，然后洗脫目標蛋白-DNA復合物。
9. 逆轉交聯：使用蛋白酶K處理樣品以逆轉交聯，釋放DNA。
10. DNA的純化和分析：純化DNA并使用qPCR、芯片或測序技術（如ChIP-seq）進行分析。
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