酶聯免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是現***物醫學研究和臨床診斷中不可或缺的基石技術之一。其**原理是利用抗原-抗體特異性結合的高親和力與酶催化的高效信號放大作用相結合。簡單來說，就是將待測物（抗原或抗體）特異性吸附（固定）在固相載體（通常是96孔聚苯乙烯微孔板）表面，然后加入酶標記的抗體或抗原進行特異性識別結合。洗去未結合的物質后，加入該酶的相應底物。酶催化底物發生顯色、發光或熒光反應，產生的信號強度與待測樣品中目標分子的含量在一定范圍內呈正相關（或負相關，取決于檢測模式）。通過測量吸光度、發光值或熒光強度，并與已知濃度的標準品繪制的標準曲線進行比較，即可對待測樣品中的目標物進行定量或定性分析。這種巧妙的設計賦予了ELISA極高的靈敏度和特異性，使其能夠檢測極低濃度（皮克甚至飛克級別）的生物分子。同一項目建議使用同一批號試劑盒以保證一致性。貴州兔ELISA試劑盒大概費用

顯色反應是將酶催化轉化為可檢測信號的關鍵步驟，需要精確控制。·底物準備：按說明書要求配制或平衡底物溶液（TMB通常需平衡至室溫，避免低溫影響反應速率）。避光保存（尤其TMB對光敏感）。確保底物新鮮，無沉淀或變色。·加底物：使用多通道移液器或排***快速、均一地向所有孔加入等量底物（避免產生氣泡）。記錄準確的加底物時間點，因為反應是動態進行的。·避光孵育：將微孔板置于暗處（或蓋上避光蓋）按說明書要求的時間（通常5-30分鐘）和溫度（通常是室溫或37°C）進行孵育。顯色時間對結果影響很大，時間過短信號弱，時間過長可能飽和或背景升高。如需精確控制，可設置定時器。·終止反應：當陽性對照孔顯色達到預期（如TMB顯藍色，標準曲線梯度明顯）或達到預定時間時，立即按相同順序和速度向每孔加入終止液（如HRP-TMB系統用1M或2MH?SO?）。終止液會改變pH，使酶失活并穩定顏色（如TMB變黃）。加入終止液后，顏色會迅速變化并穩定下來（但仍建議盡快讀數）。·讀數窗口：終止后，應在說明書規定的時間內（通常5-30分鐘內）完成吸光度讀數。放置時間過長，顏色可能緩慢褪去或沉淀，影響準確性。內蒙古科研ELISA試劑盒單價血清樣本需避免反復凍融以保證抗體活性。

ELISA（酶聯免疫吸附試驗）技術在食品安全檢測領域發揮著不可替代的作用，尤其適用于農藥殘留、獸藥殘留、非法添加劑及生物***等有害物質的快速篩查。針對不同食品基質的檢測需求，市場上已開發出多種高靈敏度和高特異性的 ELISA 試劑盒，如牛奶中的三聚氰胺、肉類中的瘦肉精（如克倫特羅、萊克多巴胺）、水產品中的孔雀石綠、糧食中的黃曲霉***等。這些試劑盒通常采用競爭法或間接法檢測原理，通過抗原-抗體的特異性結合反應，實現對目標物的定量或半定量分析。

·非特異性結合：基質中的蛋白質、脂質、DNA等非特異性吸附到固相或抗體上，增加背景或阻斷特異性結合。·結合蛋白的競爭：目標物（如***）可能與基質中的結合蛋白（如白蛋白、球蛋白）結合，減少其與檢測抗體的有效結合。·酶抑制劑或***劑：基質中存在抑制或***報告酶（HRP/ALP）活性的物質（如某些抗體、膽紅素、抗壞血酸、EDTA）。·異嗜性抗體（HeterophilicAntibodies）：人血清中存在的能與多種動物（如鼠、羊、兔）IgGFc段低親和力結合的抗體，能在沒有目標抗原的情況下橋接捕獲抗體（鼠源）和酶標檢測抗體（如羊抗鼠），導致假陽性。類風濕因子（RF，抗人IgGFc的自身抗體）也可能干擾。·高脂血癥、溶血：影響光學檢測。識別基質效應：通過回收率實驗（RecoveryTest）和線性稀釋實驗（LinearityofDilution）來評估。每次實驗需設置標準曲線以確保數據可靠性。

ELISA的結果可以根據實驗目的和試劑盒設計進行不同方式的判讀：·定量分析（Quantitative）：這是最常見的應用。通過精確的標準曲線，計算出樣品中目標物的***濃度（如ng/mL,pg/mL,IU/mL）。要求標準品濃度準確，曲線擬合良好（R2>0.99），樣品OD值落在曲線范圍內（比較好在中間線性好的部分）。適用于需要精確數值的研究和診斷。·半定量分析（Semi-quantitative）：當無法獲得或不需要***濃度值時使用。通常將樣品的OD值與標準品（或一個已知的強陽性對照）的OD值進行比較，報告為“相當于XXU/mL”或“高/中/低”。或者設定一個Cut-off值（臨界值），高于此值判為陽性，低于判為陰性。常用于大批量篩查或監測相對變化（如***前后抗體滴度變化）。·定性分析（Qualitative）：主要用于判斷樣品中目標物是否存在（陽性或陰性）。同樣需要設定一個Cut-off值。Cut-off值通常基于陰性對照的平均OD值加上2倍或3倍標準差（陰性均值+2SD/3SD），或基于ROC曲線分析確定。定性檢測在傳染病篩查（如HIV、HCV抗體）、妊娠檢測等中應用***。無論哪種判讀方式，設置合理的對照（空白、陰性、陽性、質控）和嚴格遵守操作規程是結果可靠性的基石。多克隆抗體包被的試劑盒檢測范圍更廣。內蒙古科研ELISA試劑盒單價

夾心ELISA因其高特異性，常用于復雜樣本的檢測。貴州兔ELISA試劑盒大概費用

ELISA也存在一些固有的局限性：1.*能檢測已知目標物：依賴于特異性的抗體對，只能檢測預先設定好的目標分子，無法進行無假設的發現研究（如蛋白質組學）。2.抗體依賴性：檢測性能（靈敏度、特異性、動態范圍）高度依賴所用抗體的質量。抗體的交叉反應性、批次差異會直接影響結果。3.可能存在的干擾：o基質效應（MatrixEffect）：樣品中復雜的成分（如高脂、高蛋白、溶血、某些藥物、類風濕因子、異嗜性抗體）可能干擾抗原抗體結合或酶活性，導致假陽性或假陰性。稀釋樣品有時能緩解，但會降低靈敏度。o鉤狀效應（HookEffect）：在夾心法中，當樣品中抗原濃度極高時，可能同時飽和捕獲抗體和檢測抗體，導致形成的“三明治”復合物減少，反而表現為信號下降（假陰性）。需對強陽性樣品進行稀釋復測。4.動態范圍有限：標準曲線的線性范圍通常只有2-3個數量級，極高或極低濃度的樣品可能落在曲線范圍外，需要稀釋或濃縮處理。貴州兔ELISA試劑盒大概費用