食品安全關乎公眾健康。ELISA憑借其快速、靈敏、高通量、相對低成本的優勢，成為食品中危害因子（病原微生物、***、農獸藥殘留、非法添加物、過敏原）檢測的重要工具。·檢測靶標與模式：o食源***原菌及其***：沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、李斯特菌、金黃色葡萄球菌腸***等。常用夾心法檢測菌體抗原或***蛋白。o******（Mycotoxins）：黃曲霉***B1（AFB1）、赭曲霉***A（OTA）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON嘔吐***）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、伏馬菌素（FUM）等。多為小分子，采用競爭法ELISA。o農藥殘留（PesticideResidues）：有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯類等殺蟲劑；三嗪類、磺酰脲類除草劑等。競爭法檢測。o獸藥殘留（VeterinaryDrugResidues）：***（如β-內酰胺類、磺胺類、四環素類、氯霉素）、合成***（如己烯雌酚DES）、β-受體激動劑（如克倫特羅，“瘦肉精”）等。競爭法檢測。o過敏原（Allergens）：檢測食品中殘留的花生、牛奶、雞蛋、麩質、堅果、芝麻、甲殼類等過敏原蛋白，用于生產交叉污染監控和成品檢測。夾心法。o非法添加物：如三聚氰胺（奶制品）、蘇丹紅（辣椒制品）等。競爭法或夾心法（針對蛋白摻假）。凍干粉試劑需按說明精確復溶以保證效價。湖北動物試驗ELISA試劑盒大概費用

雙抗體夾心法（SandwichELISA）是**常用、**靈敏的ELISA類型，特別適用于定量檢測大分子抗原（如細胞因子、***、病毒蛋白、可溶性受體等），要求目標抗原至少具有兩個不同的、空間上不重疊的表位。其**步驟如下：1.包被：將特異性捕獲抗體固定在微孔板孔底（試劑盒中已完成）。2.封閉：加入封閉液封閉剩余位點（通常已完成）。3.加樣：加入待測樣品或標準品，目標抗原被捕獲抗體特異性結合。4.洗滌：洗去未結合的樣品成分。5.加檢測抗體：加入酶標記的特異性檢測抗體（識別抗原的另一表位），形成“固相捕獲抗體-抗原-酶標檢測抗體”三明治復合物。6.洗滌：洗去未結合的酶標檢測抗體。7.加底物：加入酶的顯色底物，酶催化反應產生顏色（或光/熒光）。8.終止與讀數：加入終止液（如為HRP-TMB系統）停止反應，在特定波長（如450nm）下讀取吸光度（OD值）。信號強度與樣品中抗原濃度成正比。此模式特異性高，因為需要兩個抗體的雙重識別。陜西大鼠ELISA試劑盒歡迎選購通過顏色變化定量分析目標蛋白或抗體的濃度。

酶在ELISA中扮演信號放大器的角色。**常用的酶是辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）和堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase, ALP）。HRP催化過氧化氫（H?O?）氧化底物，常用底物是3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB），氧化后產生可溶性藍色產物，加入強酸（如硫酸）終止反應后變為黃色，在450nm波長處有比較大吸收峰。ALP則催化磷酸酯底物水解，常用底物如對硝基苯磷酸酯（pNPP），產物為黃色對硝基苯酚（pNP），在405nm處檢測吸光度。HRP系統通常反應更快，靈敏度更高，但易受某些抑制物影響；ALP系統相對穩定，線性范圍可能更寬。試劑盒中提供的底物通常是即用型或濃縮液，需按說明書配制。高質量的底物應能產生信號強、背景低、穩定性好的顯色反應。

ELISA技術歷經數十年發展仍被廣泛應用，歸功于其***的優點：1.高靈敏度：通過酶促反應放大信號，可檢測皮克（pg/mL）甚至飛克（fg/mL）級別的目標分子，遠高于許多傳統生化方法。2.高特異性：基于抗原-抗體高度特異的結合反應，尤其是使用單克隆抗體的夾心法，能有效區分結構相似的分子。3.高通量：96孔板（或更多孔）的設計允許同時處理大量樣品和標準品，結合自動化設備（移液工作站、洗板機、酶標儀），非常適合大規模篩查和批量檢測。4.相對簡便快速：試劑盒化使得操作流程標準化，無需復雜設備（基礎實驗室配備移液器、孵育箱、洗板設備、酶標儀即可），實驗時間通常在幾小時內完成。5.可定量：通過標準曲線可實現目標物的精確定量分析。6.應用范圍極其***：可檢測幾乎所有類型的生物分子（蛋白質、多肽、***、抗體、病原體抗原、小分子半抗原等），樣本來源多樣（血清、血漿、細胞上清、組織裂解液、尿液等）。7.成本效益相對較高：與質譜、測序等更高級技術相比，儀器和試劑成本較低，單個樣本檢測成本可控。8.結果可視化/客觀化：顯色反應肉眼可見（定性），吸光度讀數提供客觀數據。競爭性ELISA適用于小分子物質的檢測。

獲得穩定的顯色信號后，需要使用酶標儀（MicroplateReader）在特定波長下測量吸光度（OpticalDensity,OD值）。·oOPD終止后：測量492nm。opNPP（ALP系統）：測量405nm。·儀器校準與設置：確保酶標儀經過校準。使用潔凈的微孔板底板。·空白校正：讀取前，務必設置好空白孔（通常只含底物和終止液，不加任何生物組分）。儀器軟件通常會自動用空白孔的平均值對所有孔的OD值進行歸零校正（BlankSubtraction）。·數據導出：將校正后的OD值導出到數據處理軟件（如Excel,GraphPadPrism,或試劑盒配套軟件）。·繪制標準曲線：以標準品濃度（X軸，通常取對數）對對應的平均OD值（Y軸）作圖。選擇合適的數學模型進行擬合：o四參數邏輯斯蒂（4-ParameterLogistic,4PL）曲線：**常用，能很好地擬合S型曲線，尤其在高濃度和低濃度平臺區。o對數-對數（Log-Log）曲線：將濃度和OD值都取對數后線性擬合，適用于中間線性范圍較好的情況。·計算未知樣品濃度：使用擬合好的標準曲線方程，將未知樣品的平均OD值代入，即可計算出其濃度。注意樣品稀釋倍數。軟件通常能自動完成計算。·質控評估：檢查質控品（QC）的測定值是否在其預期范圍內（如均值±2SD或說明書規定的范圍）。洗滌不徹底會明顯影響實驗的特異性。甘肅豬ELISA試劑盒大概價格

血清樣本需避免反復凍融以保證抗體活性。湖北動物試驗ELISA試劑盒大概費用

間接法（IndirectELISA）主要用于檢測樣品中特異性抗體的存在和含量（如血清學檢測抗體滴度、篩選單克隆抗體）。其**步驟如下：1.包被抗原：將已知的純化抗原（如病毒蛋白、重組蛋白）固定在微孔板孔底（試劑盒中可能已包被）。2.封閉：封閉剩余位點。3.加樣：加入待測血清或抗體樣品（一抗），如果樣品中含有特異性抗體，則與包被抗原結合。4.洗滌：洗去未結合的一抗。5.加二抗：加入酶標記的抗抗體（二抗，如酶標羊抗人IgG、酶標兔抗鼠IgG）。二抗能特異性識別并結合一抗的Fc段。6.洗滌：洗去未結合的二抗。7.加底物顯色：加入酶的底物進行顯色反應。8.終止與讀數。信號強度與樣品中特異性抗體的含量成正比。間接法的優勢在于使用一種酶標二抗可以檢測多種不同來源的一抗（只要二抗能識別），靈活性高，成本相對較低。缺點是可能受類風濕因子等干擾物質影響，且信號放大程度不如夾心法。湖北動物試驗ELISA試劑盒大概費用