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山東轉錄組學主要技術

來源: 發布時間:2022-01-15

轉錄組學和基因組學目前有實用價值嗎?二者實用價值非常大,尤其是對有瘤的患者的醫治,簡直顛覆了傳統醫治的模式。轉錄組和基因組月在生物學研究中有著重要價值。例如研究某個基因功能的時候,可以構建該基因的敲除或者過表達生物,然后對比野生型進行轉錄組分析看看該基因涉及什么表達網絡。此外在醫學方面的應用也很大,例如在有的瘤病人中進行基因組學測序和分析能夠了解其中的發生的發展的驅動基因,然后能根據發展的驅動基因研究靶向藥物,從而推動瘤的藥物研發和醫治!轉錄組學無需預先設計特異性探針。山東轉錄組學主要技術

轉錄組學測序結果的影響因素?RNA的降解嚴重影響測序的質量,RNA降解后,加入poly-A后無法捕獲純化mRNA,因此,隨機引物反轉錄無法得到全部的cDNA,導致測序結果出現明顯的3‘-和5’-偏向。文庫中的poly-A多聚物的存在會對測序信號產生干擾,影響測序結果的準確性;同時由于轉錄組中轉錄本的豐度不一致,實驗前需要對樣本進行均一化處理,否則高豐度的表達基因會掩蓋低豐度表達基因,導致尋找新基因失敗或者是獲得大量無意義的重復序列。山東轉錄組學主要技術什么是轉錄組學測序?

轉錄組及轉錄組測序(RNA-seq):轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉錄組測序(RNA-seq)主要通過高通量測序研究特定組織或細胞在某個時期轉錄出來的mRNA的表達量,進而對相關基因和表型的關系進行分析。本質上講RNA-seq就是在用一種新的方法實現“基因決定性狀”的經典思路。在RNA-seq之前用于研究基因組表達分析的主要技術是基因芯片,不過由于高通量測序成本的下降,RNA-seq的運用愈來愈普遍。

轉錄組學為什么原核物種只能做有參轉錄組分析?由于原核生物的基因組中存在大量基因重疊區域、操縱子及多順反子,如果按照無參轉錄組分析策略進行組裝的話,難度較大,組裝結果存在較大風險。轉錄組學差異基因數目多少比較合理?不同的處理,不同的研究目標,差異基因的數目是不同的,從幾十個到幾千個都有可能。但是如果差異基因數目是個位數或者上萬,那么就需要和分析人員溝通一下,查一查是否有問題。轉錄組學差異基因太多,注釋信息太雜亂,怎么挑選目標基因?對不同的差異組合進行維恩圖分析,挑選共有或者特有的差異基因作為后續的研究對象;根據前人的文獻報道,挑選相關差異基因,不要局限在自己研究的物種上。普通轉錄組學測序適用于哪些情況?

轉錄組學應用于胃腸瘤轉移機制研究:circRNA是一種非編碼RNA,可以多種方式參與生物學功能,如細胞增殖、細胞周期、侵襲和轉移等。近年來研究發現,環狀RNA可以通過海綿吸附微小RNA和RNA結合蛋白參與轉錄后調控,從而影響瘤耐藥過程中的DNA修復、凋亡、增殖、細胞轉運,以及介導瘤耐藥的細胞內酶,進而在瘤耐藥中發揮重要調節作用。有研究證實通過干擾環狀RNA的表達,可以提高瘤對藥物的敏感性,提示環狀RNA可能為抗瘤藥物耐藥性的研究提供新的靶點。轉錄組學能準確地識別可變剪切位點及cSNP,UTR區域。山東轉錄組學主要技術

轉錄組學靈敏度高,可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉錄本。山東轉錄組學主要技術

全轉錄組測序為什么需要構建兩個文庫?全轉錄組測序需要構建2個測序文庫,一個小RNA文庫和一個去除核糖體RNA的鏈特異性文庫,然后分別上機測序。小RNA長度較短,一般小于50nt,采用測序策略為50SE。其他三類RNA序列一般大于200,通常在1000以上,可達幾萬,通過片段化構建150PE測序文庫。然后小RNA文庫可以獲得miRNA序列信息,去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。轉錄組學即特定細胞在某一功能狀態下轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。山東轉錄組學主要技術

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