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北京circ RNA轉錄組學研究方法

來源: 發布時間:2022-01-11

轉錄組學(Transcriptome)廣義上指某一生理條件下,細胞內所有轉錄產物的匯合,包括信使RNA(mRNA)、核糖體RNA(rRNA)、轉運RNA(tRNA)及非編碼RNA(ncRNA);狹義上指所有mRNA的匯合。轉錄組具有很強的時間和空間特性,是基因功能及結構研究的基礎和出發點,掌握了生物個體基因轉錄水平的變化,可深入了解其生命活動特征和調控機制。通過新一代高通量測序,能夠全方面快速地獲得某一物種特定組織在某一狀態下的幾乎所有轉錄本的基因序列信息。轉錄組學測序比其他研究方法有哪些優勢?北京circ RNA轉錄組學研究方法

單細胞轉錄組關鍵步驟:單細胞的分離和捕獲:溫和分離,稀有細胞。轉錄本的捕獲和擴增:RNA測序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕獲效率10%(5-**NA測序需要1ngDNA,極限稀釋加移液分離單細胞;顯微操作分選單細胞;流式分選帶有表面Marker的單細胞;激光切割實體組織;微流控技術;磁珠捕獲,主要用于CTC。它的一個優點是可以結合流式細胞熒光分選(FACS,fluorescentactivatedcellsorting)根據表面Marker分選細胞。因此特別適合分選細胞子集用于測序。它的另一個優點是可以獲得細胞形態全覽圖,提供另外一個維度的信息,可用于鑒定微孔中是否有損傷的細胞或雙份細胞,主要缺點是通量低且每個細胞所需的工作量相當大。山東靶向轉錄組學轉錄學組測序能夠提供更高的檢測通量。

什么叫轉錄組學?廣義轉錄組是指生命單元(通常是一種細胞)中所有按基因信息單元轉錄和加工的RNA分子(包括編碼和非編碼RNA功能單元),或者是一個特定細胞所有轉錄本的總和.它的研究對象就是這些RNA與蛋白質分子和它們所組成的基因功能網絡以及它們與細胞功能的關系.而狹義轉錄組是指可直接參與翻譯蛋白質的mRNA總和.研究生物細胞中轉錄組的發生和變化規律的科學就稱為轉錄組學(tran—scriptomics)。轉錄組學即特定細胞在某一功能狀態下轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。

circRNA轉錄組學成環機制:circRNA環化方式分為內含子環化和外顯子環化。目前主流的成環機制可歸類為:依賴于剪切體的索尾插接環化。在mRNA前體上,通過連續的組裝小核核糖體蛋白從而催化外顯子下游的5′供體的位點連接到上游的3′受體的位點,索尾插接形成環化,然后通過剪切形成circRNA。順式作用元件促進circRNA形成。部分circRNA外顯子兩側的內含子中含有反向互補序列,首先在剪切位點上并排形成RNA雙鏈體,再通過可變剪切形成帶內含子和不帶內含子兩種不同的circRNA。或者外顯子內部以及兩側的內含子可以競爭進行RNA配對,然后通過可變剪切形成不同類型的circRNA。轉錄組學可以直接測定每個轉錄本單核苷酸分辨率的準確度。

轉錄組學測序類型:1.根據RNA種類:可以分為mRNA測序,SmallRNA測序,LncRNA測序、CircRNA測序、全轉錄組測序等。2.根據物種特點:比如真核生物或者原核生物,是否有參考基因組,測序平臺的不同,分為真核有參和無參轉錄組測序,原核轉錄組測序,全長轉錄組測序等。3.根據相互關系:分為互作轉錄組,比較轉錄組等等;此外,基因組甲基化會影響到基因的轉錄調控,也屬于轉錄調控測序范疇;還有用于研究轉錄因子與DNA的交互作用或組蛋白修飾在基因組上的分布的ChIP-Seq,研究RNA與蛋白互作關系的RIP-Seq,以及研究RNA甲基化的MeRIP-Seq等。什么是轉錄組學測序?北京circ RNA轉錄組學研究方法

轉錄學組測序能夠提供更準確的數字化信號。北京circ RNA轉錄組學研究方法

轉錄組學測序比其他研究方法有哪些優勢?轉錄組學測序具有以下優勢:(1)可以直接測定每個轉錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準確度,同時不存在傳統微陣列雜交的熒光模擬信號帶來的交叉反應和背景噪音問題;(2)靈敏度高,可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉錄本;(3)可以對任意物種進行全基因組分析,無需預先設計特異性探針,因此無需了解物種基因信息,能夠直接對任何物種進行轉錄組分析,同時能夠檢測未知基因,發現新的轉錄本,并準確地識別可變剪切位點及cSNP,UTR區域。(4)檢測范圍廣,高于6個數量級的動態檢測范圍,能夠同時鑒定和定量稀有轉錄本和正常轉錄本。北京circ RNA轉錄組學研究方法

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