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杭州動物靶向代謝組學質譜鑒定

來源: 發布時間:2022-01-08

代謝組學概念:基因與蛋白質的表達緊密相連,而代謝物則更多地反映了細胞所處的環境,這又與細胞的營養狀態,藥物和環境污染物的作用,以及其它外界因素的影響密切相關。因此有人認為,“基因組學和蛋白質組學告訴你什么可能會發生,而代謝組學則告訴你什么確實發生了。”代謝組學的概念來源于代謝組,代謝組是指某一生物或細胞在一特定生理時期內所有的低分子量代謝產物,代謝組學則是對某一生物或細胞在一特定生理時期內所有低分子量代謝產物同時進行定性和定量分析的一門新學科。它是以組群指標分析為基礎,以高通量檢測和數據處理為手段,以信息建模與系統整合為目標的系統生物學的一個分支。代謝組學的研究介于基因、蛋白質和細胞、組織之間。杭州動物靶向代謝組學質譜鑒定

GC-MS非靶向代謝組學能檢測到哪些類別的代謝物?衍生化極大地拓展了GC/MS的檢測分析范圍。GC/MS能檢測到有機酸、氨基酸、單糖、糖醇、胺類、脂肪酸、吲哚、單甘油酯、核苷、二糖、生育酚、甾醇和膽汁酸等代謝物。如何提高定性準確度?GC/MS的定性有雙重標準,一是保留指數,二是質譜信息的相似度(similarity)。不同于LC/MS的軟電離源,GC/MS使用的EI源屬于硬電離,能量較強且穩定,在將代謝物分子電離后,分子離子峰進一步碎裂產生豐富的碎片離子。因此,我們很難在GC/MS上看到分子離子峰。GC/MS提供的是代謝物的“指紋圖譜”,將儀器得到的實際指紋圖譜和質譜庫(如NIST庫)進行比對后,我們將會得到一個叫相似度的指標。保留指數和相似度都必須滿足設定的閾值,軟件才會給出色譜峰的定性結果。然后采用標準品質譜信息進行完全比對定性,也就是說只有經過標準品比對,代謝物才是被100%定性。杭州動物靶向代謝組學質譜鑒定代謝組學技術可應用于病因病機研究。

什么是非靶向代謝組學、靶向代謝組學?(1) 非靶向代謝組學(Untargeted metabolomics)即非目標代謝組學或發現代謝組學,無偏向性地對所有小分子代謝物(一般相對分子量小于1000)同時進行檢測分析的代謝組學。(2) 靶向代謝組學(Trgeted metabolomics)則為目標性代謝組學,著重對于設定好的目標代謝物進行定性、量檢測分析和研究。相比于其他組學,代謝組學有哪些特殊的優勢?系統生物學有基因組學、轉錄組學、蛋白組學和代謝組學。代謝組學作為系統生物學的一個重要的分支,與其他組學相比有著其特有的優勢,主要體現在以下幾點:(1) 基因與蛋白質表達的微小變化會在相應代謝物水平上得到放大,更容易被檢測。(2) 代謝物的種類要遠小于基因和蛋白的數目。(3) 可與生物表型變化建立直接相關性。

代謝組學的研究分為靶向和非靶向。通俗說就是你有沒有目標分子。傳統代謝組學研究利用的是GC-MS,因為代謝物大多數都不是高沸點的,而且GC-MS有龐大的數據庫檢索。然后發展的LC-MS差不多,就是克服了一些高沸點物質難以檢測的弊端。NMR用于代謝組學不是很多,一方面是NMR這個東西入行起點有點高,另一方面是樣品太復雜而且靈敏度不高。但是NMR樣品處理簡單,無損。不需要各種衍生化。而且NMR對于物質結構的指認要比MS更精確(比如異構體)因此對定性非常有用,成為非靶向代謝組學的重要方法。代謝組學是系統生物學的組成部分。

代謝組學尿液樣本收集:1)取空腹晨尿、中段尿(臨床)或晨間1 h尿(動物)于50 mL離心管中;2)4 ℃ 下10000 rpm離心10 min取上清,用1.5 mL離心管分裝,保存于-80 ℃。3)動物1 h尿量不夠的情況下,可分多次收集尿液;如需收取24 h尿液,需要使用帶低溫裝置的代謝籠收集,并且及時凍存樣本。4)收集完尿液樣本后,建議使用液氮淬滅15 min后,再分裝多管后于-80 ℃凍存。組織樣本收集:動物組織(包括腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉和皮膚等;軟體動物如血吸蟲):1)取適量組織,用預冷的PBS緩沖液或生理鹽水清洗干凈;2)迅速剝去非必需的脂肪和結締組織,再用PBS緩沖液或生理鹽水沖洗干凈;3)用干凈的無塵吸水紙吸干水分,將組織分成50-100 mg / 管分裝待用;4)管子上做好標記后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min,-80 ℃凍存;干冰運輸。靶向代謝組學著重對于設定好的目標代謝物進行定性、量檢測分析和研究。上海常規靶向代謝組學分析研究

代謝組學的研究處于生物信息流的中游。杭州動物靶向代謝組學質譜鑒定

代謝組學在系統生物學中有什么作用?它的地位如何?代謝物作為生物體表型的基礎能夠幫助我們更直觀有效地了解生命現象揭示生命本質。代謝組學本質上是指從整體上研究生物體的代謝物,是對某一生物、組織或細胞中的所有低分子量代謝產物進行定性與定量分析的一門科學。代謝組學以指標分析為基礎,高通量檢測為手段,通過研究生物體內代謝物的種類與數量及其變化規律來闡述機體在正常生命狀態及環境變化后的代謝過程。代謝組是系統生物學的分支學科之一。其研究內容主要包括對代謝物進行定性或定量分析,不同基因型的生物體進行代謝組學表型研究,不同生長環境及加物理、化學或生物性刺激后個體代謝產物的應答,進行代謝途徑或代謝網絡解析與轉基因評價。杭州動物靶向代謝組學質譜鑒定

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