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南京4D定量蛋白質組學一般流程

來源: 發布時間:2022-02-17

蛋白組學研究怎么做?PRM:平行反應監測(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監視技術,能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現對目標蛋白質/肽段進行一定定量,因此也被稱之為基于液相色譜質譜聯用技術的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技術基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質譜平臺,首先利用四級桿質量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collisioncell中對母離子進行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。蛋白質組(Proteome)一詞,源于蛋白質(protein)與基因組(genome)兩個詞的組合。南京4D定量蛋白質組學一般流程

PRM靶向定量蛋白質組學分析流程是怎樣的?要做PRM首先要明確目標蛋白(或多肽)是什么,設計和建立針對這些目標蛋白PRM質譜采集方法,然后對待測樣品進行PRM數據采集,將得到的原始譜圖數據導入分析軟件提取子離子信息進行定量。另外,如果配制已知濃度的標準肽段,用PRM額外做一個標準曲線,即可實現一定的定量。PRM靶向定量蛋白質組學技術能應用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術來實現。具體說來,比如驗證定量蛋白質組學中某些蛋白的變化,多肽的相對和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點的定量,想同時定量多個蛋白的情況等,都可以用PRM來做。貴州外泌體蛋白質組學研究蛋白質組學技術有電噴霧質譜。

蛋白質組的研究不但能為生命活動規律提供物質基礎,也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據和解決途徑。通過對正常個體及病理個體間的蛋白質組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質分子”,它們可成為新藥物設計的分子靶點,或者也會為疾病的早期診斷提供分子標志。確實,那些世界范圍內銷路比較好的藥物本身是蛋白質或其作用靶點為某種蛋白質分子。因此,蛋白質組學研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業帶來巨大的利益。蛋白質組學的研究是生命科學進入后基因時代的特征。

蛋白質組學在醫療和健康方面有什么應用?基于質譜的蛋白質組學是目前比較主流的高通量蛋白質研究手段,當前在醫療健康方面的應用主要集中于基礎研究和轉化醫學。隨著質譜、系統生物學、生物信息學等相關學科的發展,我認為今后我們會更多地在現實生活中見到蛋白質組學相關的應用。如定量胰島素、鑒定血紅蛋白氨基酸突變(鐮刀形紅細胞癥)、糖化血紅蛋白比例測定等。從測試體量估計,應該遠小于1%的ELISA測試量。由于成本和通量等原因,蛋白質組學技術并不如ELISA適合大量的日常分析。但對于一些分析有問題的項目,采用基于質譜(或二維膠等手段)的蛋白質組學有獨特的技術優勢。另外,蛋白質組學方法開發和驗證周期短,在中高級特殊應用(如極少使用的特殊蛋白指標臨床檢測、未知疾病研究和控制)中也有其獨特優勢。蛋白質組學的研究是生命科學進入后基因時代的特征。

蛋白組學技術:蛋白質組學研究的首要任務是建立獲取和分析蛋白質的常規、可靠、有效的技術。為達到這一要求,就需要樣品準備、數據獲取標準化及自動化,也就是要有可重復的高通量的技術。蛋白質組學技術手段在不斷完善,其工作流程,包括蛋白質樣本的制備、分離、定量及鑒定。由雙向凝膠電泳、質譜技術、酵母雙雜交系統、蛋白質微陣列技術、能進行大規模數據處理的計算機系統和軟件、軟電離技術及生物信息學技術構成了蛋白質組學研究的主要技術體系。其中蛋白質組學技術中的質譜技術是現在比較常用的一種蛋白質鑒定技術。蛋白質組的概念與基因組的概念有許多差別。北京Label free多肽組學服務

蛋白質組學在醫療和健康方面有什么應用?南京4D定量蛋白質組學一般流程

定量蛋白質組學技術:定量蛋白質組學技術主要分為標記(label)和非標記(labelfree)定量策略,標記策略又分為體內標記和體外標記兩種。細胞內蛋白質組豐度的動態變化對各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發生和發展進程中,常常伴隨著某些蛋白質的表達異常。定量蛋白質組學就是把一個基因組表達的全部蛋白質或一個復雜的混合體系中所有的蛋白質進行精確的定量和鑒定。非標記(labelfree)的定量蛋白組學技術,Labelfree定量蛋白組學技術是通過液質聯用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析,無需使用昂貴的穩定同位素標簽做內部標準,只需分析大規模鑒定蛋白質時所產生的質譜數據,比較不同樣品中相應肽段的信號強度,從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。南京4D定量蛋白質組學一般流程

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