把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時(shí)。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話，要用TBST泡洗三遍再轉(zhuǎn)移至一抗溶液中，BSA封閉的可以直接轉(zhuǎn)移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個(gè)長(zhǎng)方形，這里的寬與長(zhǎng)相對(duì)應(yīng))不大于8毫米，我習(xí)慣置于15毫升離心管中孵育，兩條膜"背對(duì)背"式放置于一個(gè)管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米，就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過(guò)夜，一般是12-18個(gè)小時(shí)，注意放置水平，用搖床。內(nèi)參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現(xiàn)條帶連在一起的情況，這時(shí)可以縮短孵育時(shí)間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個(gè)小時(shí)足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗，這樣背景會(huì)干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液，我們一般一條膜一個(gè)槽地孵。2、顯影這一步有個(gè)細(xì)節(jié)可能有些同學(xué)沒(méi)注意到，就是ECL發(fā)光液要與HRP反應(yīng)一分鐘后顯影效果才會(huì)更好，還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋，一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。放血致失血性貧血小鼠模型。上海裸鼠動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

導(dǎo)師給我們上的堂課往往就是交代我們要詳細(xì)記好實(shí)驗(yàn)記錄，只要是和實(shí)驗(yàn)相關(guān)的，無(wú)論是照片，還是文字，必須要及時(shí)事無(wú)巨細(xì)地詳細(xì)記錄。并且要備份好每一份實(shí)驗(yàn)記錄。我個(gè)人一般喜歡每天及時(shí)地記在「科研實(shí)驗(yàn)記錄本」上面，然后拍照掃描成電子版儲(chǔ)存在電腦和云端。時(shí)間規(guī)劃首先，個(gè)人是不贊同每天24小時(shí)泡在實(shí)驗(yàn)室的，高效率是關(guān)鍵。建議提前一天規(guī)劃好第二天需要做的事情，按照代辦事項(xiàng)的格式逐條列出，哪一個(gè)時(shí)間段需要做什么事情？這樣的好處有兩點(diǎn)，一個(gè)是自己提前把時(shí)間預(yù)約好，可以留出足夠的時(shí)間休息和娛樂(lè)；另一個(gè)是在執(zhí)行計(jì)劃的時(shí)候往往會(huì)有一種時(shí)間緊迫感，辦事起來(lái)往往更高效且不會(huì)遺漏。總之，預(yù)實(shí)驗(yàn)就是迷你版正式實(shí)驗(yàn)，希望小伙伴們?cè)谶M(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候一定要盡可能地準(zhǔn)備周全，這樣才能快的推進(jìn)正式實(shí)驗(yàn)。寧夏外包動(dòng)物模型技術(shù)通過(guò)高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建非酒精性脂肪肝模型。

酒精性肝病(AH)大鼠模型建模方法【方法】1、正常組大鼠自由飲水。2、酒精性脂肪肝(alcoholicfattyliverdisease，AFL)模型組大鼠自由飲用酒精飲料，其酒精濃度從5%開始，每個(gè)濃度維持一周，依次改為10%、15%、20%、25%、30%、35%至40%，以40%濃度持續(xù)至12周。3、在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各組大鼠均給以普通顆粒飼料，共持續(xù)為12周。4、第12，動(dòng)物禁食12h，稱重，下腔靜脈取血處死，血液離心取上清備用。【檢測(cè)】1、生化指標(biāo)檢測(cè)檢測(cè)ALT、AST、TC、TG、FFA、LDL-C、HDL-C和血糖的含量。2、組織病理學(xué)酒精性脂肪肝模型組大鼠肝臟體積增大，明顯腫脹，包膜緊張，邊緣圓鈍，呈奶黃色，切面油膩，腹腔內(nèi)尤以有腹膜后脂肪堆積明顯。HE染色顯示，正常組肝臟內(nèi)無(wú)明顯脂肪變性，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞索圍繞靜脈呈放射排列。模型組肝臟彌漫大量脂肪變性，細(xì)胞體積增大，呈氣球樣變。3、標(biāo)志因子水平ELISA法測(cè)定血清中TNF-α和ApoB的含量。

經(jīng)多級(jí)乙醇至水洗：二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸餾水洗2min；4)蘇木素染色5分鐘，自來(lái)水沖洗；5)鹽酸乙醇分化30秒；6)自來(lái)水浸泡15分鐘；7)置伊紅液2分鐘。8)常規(guī)脫水，透明，封片：95％乙醇(i)1min→95％乙醇(ⅱ)1min→100％乙醇(i)1min→100％乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3：1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹脂封固。9)顯微鏡下拍照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4個(gè)月時(shí)，與ctrl(對(duì)照)小鼠比較，sixko小鼠的視網(wǎng)膜外核層已經(jīng)開始變薄，表明感光細(xì)胞死亡(圖7)。實(shí)施例5視網(wǎng)膜冰凍切片免疫染色：取4月齡的由實(shí)施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后，快速取眼球，并放入4％的pfa中，冰上固定15min后，在角膜上剪口，然后繼續(xù)冰上固定。2h后，pbs緩沖液沖洗3遍，然后將眼球置于30％蔗糖溶液中脫水2h，然后解剖鏡下剪去角膜及晶體，oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后，取出oct包埋的眼球，置于冰凍切片機(jī)-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后，選取質(zhì)量較高的片子于37℃烘箱放置30min，然后免疫組化筆在有視網(wǎng)膜組織的地方畫圈，pbs洗三遍以去除oct。鹽酸阿霉素誘導(dǎo)心衰小鼠模型。

znf124是一種編碼鋅指蛋白的新基因。鋅指蛋白是一類具有手指狀結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)基因調(diào)控起重要的作用。znf124蛋白可穿過(guò)核孔進(jìn)入核內(nèi)，作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控其他基因的表達(dá)。目前針對(duì)znf124蛋白功能的研究報(bào)道并不多，對(duì)其功能也知之甚少，znf124與一種先天性系統(tǒng)發(fā)育疾病dandy-walker復(fù)合征(dandy-walkercomplex，dwc)相關(guān)。此外，znf124被認(rèn)為參與了前體生長(zhǎng)因子(vegf)對(duì)人造血細(xì)胞凋亡的抑制作用，表明znf124在人體生命活動(dòng)中承擔(dān)有重要功能。發(fā)明人的另一研究表明，znf124基因突變與rp有關(guān)，對(duì)探索rp的致病機(jī)制有極大幫助。因此，深入研究znf124對(duì)視網(wǎng)膜色素變性疾病的及病因探討潛力巨大。四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠模型。西藏豚鼠動(dòng)物模型建模

小鼠CLP盲腸穿孔致膿毒血癥模型。上海裸鼠動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

然后5％的nds。含有％triton)封閉通透2h，孵育一抗，4℃過(guò)夜。第二天，pbs清洗三次后，孵育相應(yīng)的熒光二抗，然后再用pbs清洗三次，封片，觀察。結(jié)果見圖8，在小鼠4月齡時(shí)，通過(guò)視網(wǎng)膜冰凍組織切片染色外節(jié)抗體rhodopsin以及內(nèi)節(jié)抗體nak-atpase后發(fā)現(xiàn)，相較于野生型小鼠，gm20541基因敲除純合子小鼠(圖中sixko)視網(wǎng)膜外節(jié)明顯縮短，表現(xiàn)出了明顯退化表征。綜上，可以看出，本發(fā)明實(shí)施例以小鼠為例，通過(guò)cre-loxp基因敲除技術(shù)，在小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞中特異性敲除gm20541基因，小鼠表現(xiàn)出了視力受損，視細(xì)胞外節(jié)變短退化以及視細(xì)胞丟失等視網(wǎng)膜色素變性疾病典型表征。由此充分說(shuō)明，在視網(wǎng)膜前體細(xì)胞敲除gm20541基因，可以使目標(biāo)動(dòng)物表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性疾病。視網(wǎng)膜前體細(xì)胞敲除gm20541基因的動(dòng)物，可以作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型。該疾病模型可以用于視網(wǎng)膜色素變性疾病研究等領(lǐng)域中，為該疾病的研究例如發(fā)病過(guò)程、機(jī)制以及相關(guān)藥物的篩選提供一種新的模型。雖然本發(fā)明實(shí)施例展示了在小鼠的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞敲除gm20541基因后的表型，但本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解到，小鼠作為哺乳動(dòng)物的代表性動(dòng)物，在其他的哺乳類動(dòng)物中敲除gm20541基因或其同源基因也應(yīng)當(dāng)具有相似的表型。上海裸鼠動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室